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第十二章 细胞衰老与死亡 第一节 细胞衰老(cellular aging或cell senescence) ●细胞衰老的概念 ●细胞衰老的特征 ●细胞衰老的分子机理 又称老化，指生物发育成熟后，在正常情况下，随着年龄的增加，其机能和结构发生退行性变化，而趋向死亡的不可逆现象。 衰老和死亡是生命的基本现象，衰老过程发生在生物界的整体水平、种群水平、个体水平、细胞水平以及分子水平等不同的层次。 （一）“差误”学说 DNA复制效率下降；核酸、蛋白质、酶等大分子的合成差错，导致细胞功能下降，逐渐衰老、死亡。 （二）细胞有限分裂学说 1961年，Hayflick 提出“Hayflick limit”学说。 1990年，Harley 等发现体细胞染色体的端粒DNA 会随 着分裂次数的增加而不断缩短。当缩短到Hayflick 点 时，细胞停止复制，而衰亡。 （如：人的成纤维细胞端粒每年缩短14～18bp）。 第二节 细胞凋亡(Apoptosis) ●细胞凋亡的概念及其生物学意义 ●细胞凋亡的形态学和生物化学特征 ●细胞凋亡的分子调控机理 一、细胞凋亡的概念及其生物学意义 ●概念：细胞凋亡是一个主动的由基因决定的自动结束生命的过程，所以也常被称为细胞程序性死亡（PCD）。 ●生物学意义：细胞凋亡对于多细胞生物个体发育 的正常进行，自稳平衡的保持以及抵御外界各种 因素的干扰方面都起着非常关键的作用。 二、细胞凋亡的形态学和生物化学特征 ●细胞凋亡与坏死(necrosis) ●细胞凋亡的形态学特征 ●细胞凋亡的生化特征 ●诱导细胞凋亡的因子 ●细胞凋亡的检测 细胞凋亡与坏死(necrosis) ●二者的主要区别是，细胞凋亡过程中，细胞质膜反折，包裹断裂的染色质片段或细胞器，然后逐渐分离，形成众多的凋亡小体，凋亡小体则被邻近的细胞所吞噬。整个过程中，细胞质膜的整合性保持良好，死亡细胞的内容物不逸散到胞外环境中去，因而不引发炎症反应。相反，在细胞坏死时，细胞质膜发生渗漏，细胞内容物，包括膨大和破碎的细胞器以及染色质片段，释放到胞外，导致炎症反应。p193 细胞凋亡的形态学特征 ◆凋亡的起始：细胞表面的特化结构如微绒毛消失，细胞间接触的消失，但细胞膜依然完整；线粒体大体完整，但核糖体逐渐从内质网上脱离，内质网囊腔膨胀，并逐渐与质膜融合；染色质固缩，形成新月形帽状结构等形态，沿着核膜分布 ◆凋亡小体的形成：核染色质断裂为大小不等的片段，与某 些细胞器如线粒体一起聚集，被反折的细胞质膜所包围。细胞表面产生了许多泡状或芽状突起，逐渐形成单个的凋亡小体 ◆凋亡小体逐渐为邻近的细胞吞噬并消化。 细胞凋亡的生化特征 ◆细胞凋亡的主要特征是形成大小为 180～200bp特征性的DNA ladders ◆凋亡细胞组织转谷氨酰胺酶积累并达 到较高水平 诱导细胞凋亡的因子 ◆物理性因子，包括射线（紫外线，? 射线等），较温和的温度刺激（如热激，冷激）等。 ◆化学及生物因子：包括活性氧基团和分子、DNA和蛋白质合成的抑制剂、激素、细胞生长因子、肿瘤坏死因子?（TNF?）等。 细胞凋亡的检测 ◆形态学观测：染色法、透射和扫描电镜观察。 ◆DNA电泳：DNA片段就呈现出梯状条带。 ◆TUNEL测定法，即DNA断裂的原位末端标记法。 ◆流式细胞分析 根据凋亡细胞DNA断裂和丢失，采用碘化丙 啶使DNA产生激发荧光，用流式细胞仪检出 凋亡的亚二倍体细胞，同时又能观察细胞 的周期状态。 三、细胞凋亡的分子调控机理 Sydney Brenner 线虫是研究个体发育和细胞程序性死亡的理想材料（生命周期短，细胞数量少）。 线虫神经系统由302个细胞组成。这些细胞来自于407个前体细胞。也就是说105个细胞发生了程序性死亡。 控制线虫细胞凋亡的基因主要有3个Ced-3、Ced-4和Ced-9 Ced-3和 Ced-4的作用是诱发凋亡； Ced-9抑制Ced-3、Ced-4的作用。 1、Caspase家族与凋亡 Caspase家族与凋亡 ◆Caspase家族 ·Caspase活性位点是半胱氨酸(Cysteine)， 裂解靶蛋白位点是天冬氨酸残基后的肽 键，因此称为Cysteine aspartic acic specific protease，即Caspase。 ◆Caspase活化 ◆胞外信号分子诱导的细胞凋亡途径 Caspase活化 Caspase自身以非活化的Procaspase存在，其激活依赖于其他的Caspase在它的天冬氨酸位点裂解活化。 Bcl-2家族、线粒体与细胞凋亡 ◆Bcl-2是一种