磁性纳米药物智能控释系统的构建与体内外生物学评价分析-construction of intelligent controlled release system for magnetic nano-drugs and analysis of biological evaluation in vivo and in vitro.docx

Construction of Intelligent Controlled Drug Release Systems Based on Magnetic Nano-carriers and Their BiologicalEvaluations in vitro and in vivoA Thesis Submitted to Chongqing University in Partial Fulfillment of the Requirement for theDoctor’s Degree of EngineeringByDing XingweiSupervised by Prof. Cai Kaiyong Specialty: Biomedical EngineeringBioengineering College of Chongqing University, Chongqing, ChinaApril, 2014中文中文摘要重庆大重庆大学博士学位论文II PAGE PAGE VI摘 要随着纳米技术和分子生物学的进步，具有特殊功能的纳米颗粒被广泛应用于 疾病的诊断和治疗，尤其在肿瘤治疗方面。通过一些功能性分子修饰纳米颗粒， 使功能化纳米颗粒在医学治疗中具有体内实时诊断和药物运输等特性，有效地提 高治疗效率且减少药物副作用。磁性纳米颗粒由于本身固有的磁学性能而受到广泛关注。磁性 Fe3O4 纳米颗粒 因其制备方法简单，生物相容性好以及表面易修饰等特性，被广泛应用于磁性分 离，生物传感器，体内医学成像，药物输送，组织修复等方面，对肿瘤治疗而言， 其存在以下问题：1.如何在磁性 Fe3O4 纳米颗粒上，构建刺激性响应智能纳米药物 控释系统，使其在恶性肿瘤组织中实现智能按需释药；2.如何评价磁性 Fe3O4 颗粒 药物载体在活体动物中的作用效果，从而为其在临床的安全使用提供科学依据。基于上述问题，本文以生物大分子修饰磁性 Fe3O4 纳米颗粒为构建了具有温度 响应性磁性脂质体药物控释系统、还原响应性自组装磁性药物控释系统及 pH-响应 性酰肼/聚（甲基丙烯酸甲酯）(PMMA)修饰磁性药物控释系统。本文对上述三种 药物控释系统进行了一系列材料表征、药物控释以及体外生物学评价。此外，对 pH-响应性 PMMA 修饰磁性药物控释系统还进行了动物体内肿瘤抑制评价，考察 了该系统对动物体内各器官所产生的副作用，为磁性 Fe3O4 纳米颗粒更好地应用于 临床医学提供科学依据。主要研究内容如下：1. 小尺度 Fe3O4 纳米颗粒的合成。利用化学溶胶-凝胶法、化学共沉淀法和热分解法合成了尺寸小于 100 nm 的 Fe3O4 纳米颗粒。透射电子显微镜观察表明：溶胶-凝胶法制备的 Fe3O4 纳米颗粒呈 圆形，分散性差，粒径为 90.4 ± 4.7 nm；化学共沉淀法制得的油酸包裹的 Fe3O4 纳 米颗粒呈圆形，分散性好，粒径为 14.3 ± 3.9 nm；热分解法制得的 Fe3O4 纳米颗粒 在 320℃下分解成圆形，380℃下呈立方体形，且分散性均很好，粒径分别为 16.5 ± 2.1 nm 及 30 ± 4.1 nm。傅里叶变换红外光谱分析表明：所制得的纳米颗粒均在 590 cm-1 处有特征峰，表明所制材料为 Fe3O4。磁滞回线结果表明，四种 Fe3O4 纳米颗 粒的磁化强度值分别为：27.113 emu/g，57.759 emu/g，38.599 emu/g，26.998 emu/g。2. 温度响应性磁性脂质体智能药物控释系统的构建与生物学评价。 在温敏性脂质体中掺入粒径为 14.3 ± 3.9 nm 疏水性 Fe3O4 颗粒构建温度响应性药物控释系统。利用 Fe3O4 颗粒的磁响应性，分离纯化出所需的磁性脂质体。透射电镜及扫描电镜观察表明磁性脂质体分散性好，粒径分布为 105.3 ± 13.0 nm。傅里 叶变换红外光谱分析，磁滞回线分析及热重分析证实磁性脂质体已成功制备。分 别载入亲水性模型药物羟基荧光素和疏水性药物阿霉素，利用荧光分光光度计检测在不同温度下，磁性脂质体释放的药物量，证实所制备的磁性脂质体药物控释系统具有温度响应性。激光共聚焦和透射电镜观察表明该药物载体能被乳腺癌细 胞大量吞噬，并分布于细胞质内。细胞活性检测和细胞核形态观察结果表明磁性 脂质体被乳腺癌细胞吞噬后能将药物释放，并诱导细胞凋亡或死亡。3. 还原响应性两亲性聚合物 HA-SS-PLA/Fe3O4 自组装药物控释系统的构建 与生物学评价。利用二硫键将亲水性透明质酸（HA）以及疏水性聚乳酸（PLA）交联形成两 亲性共聚物，通过其自组装作用，将疏水性药物紫杉醇及疏水性磁性 Fe3O4 纳米颗 粒包裹至胶束疏水内腔中，构建外壳亲水的还原响