免疫学检测原理和临床应用.pptVIP

用FITC-抗IgM 单抗计数B细胞 二、淋巴细胞功能测定 体外试验 淋巴细胞增值试验 细胞毒试验 分泌功能测定 3H-TdR渗入法 MTT法 形态学计数法 51CR释放法 乳酸脱氢酶释放法 细胞凋亡检查法 检测细胞因子分泌细胞 检测抗体形成细胞 体内试验：皮试 二、淋巴细胞功能测定 （一）淋巴细胞功能测定的体外试验 1. 淋巴细胞增殖试验 ●刺激物 * 非特异性：丝裂原PHA、Con A和PWM，抗CD2、CD3单抗，同种MHC等 * 特异性：破伤风类毒素、PPD、白色念珠菌、肿瘤细胞等 ●方法：核素掺入法、MTT法和形态学计数法 淋巴细胞增殖实验（核素掺入法） 2. 细胞毒试验 CTL、NK细胞可直接杀伤靶细胞（如肿瘤细胞、移植供体细胞、病毒感染细胞等） ● 51Cr释放法 ● LDH释放法 ● 细胞凋亡检查法 DNA Ladder电泳图谱 TUNEL法检测凋亡细胞 流式细胞术----Annexin-V/PI双染法 凋亡早期，细胞表面变化 ，磷脂酰丝氨酸（PS）外翻。 ANNEXIN V是种磷脂结合蛋白，作为探针能识别凋亡细胞。 细胞对细胞活性染料（如PI）有拒染性。而坏死细胞能被PI染色。 （二）淋巴细胞功能测定的体内试验 迟发型超敏反应皮肤试验 ●特异性: PPD皮试、过敏原皮试 ●非特异性: PHA 皮试、DNCB皮试 （三）抗原特异性T淋巴细胞检测 MHC/多肽四聚体技术（Tetramer-Technology） T细胞表面的T细胞受体( TCR)可特异性识别、结合抗原提呈细胞或靶细胞表面的MHC-抗原肽复合物。 体外将MHC分子与抗原肽进行复性重叠形成MHC-肽复合物。用荧光素标记的亲和素把四个MHC-肽单体形成MHC四聚体可以结合到特异性的CTL表面。 第3节 免疫分子的检测 一、免疫球蛋白的测定 单扩，ELISA、RIA，免疫电泳等 二、补体测定 单扩，ELISA、RIA， CH50 三、细胞因子检测 1. 免疫学测定法 ●分泌性细胞因子检测：ELISA, RIA, ELISPOT, WB, immuno-PCR ●胞内细胞因子检测：FCM 2. 生物活性测定法 促进细胞增殖和增殖抑制法, 抗病毒活性测定法, 直接杀伤法, 趋化活性测定法 胞内细胞因子的检测 LPS活化单核细胞内TNF-α的测定R1：淋巴细胞；R2：单核细胞 Cytokine network Lab Invest 2003, 83:1131–1146 cytokine bead arrays(CBA) 四、CD分子、表面受体和黏附分子的检测 ●细胞表面分子：间接免疫荧光法，流式细胞术等 ●可溶性分子：ELISA等 五、HLA分型 ●方法：血清学方法，细胞学方法 ●应用：同种移植供受者配型，亲子鉴定，某些疾病研究 第4节 免疫相关基因的检测 一、细胞因子基因组DNA或mRNA检测 Northern 杂交，原位杂交，PCR扩增产物杂交分析等 二、TCR及BCR克隆性基因重组分析 Southern 杂交，PCR 三、HLA等位基因分型技术 小 结 ●利用抗原与相应抗体可以特异性结合的特点建立多种检测方法。 ●抗原抗体反应分为凝集反应和沉淀反应，而免疫标记技术具有灵敏度高，能定性、定量等优点，应用十分广泛。 ●免疫细胞具不同表面标志，利用特异性抗体可鉴别不同的细胞群体及其数量；体外功能试验反映某一细胞群的功能，体内功能试验可反映整体免疫功能水平。 ●免疫分子的检测可采用免疫学方法、生物活性测定法及分子生物学方法。 复习思考题 1. 名词解释：沉淀反应，凝集反应， ELISA， immunoblot (Western blot) 2. 抗原抗体反应有哪些特点？哪些基本类型？ 3. 免疫标记技术的意义，有哪些免疫标记技术？ 4. 有哪些方法可检测T、B细胞的功能？细胞增殖试验和细胞毒性试验各有哪些基本方法？ * Strategies for bone marrow transplantation: In bone marrow transplantation, the most crucial factor in donor selection is class?II MHC compatibility. Once again an identical twin is the ideal donor. From poorly matched grafts, T lymphocytes can be removed using monoclonal antibodies. The r