阿魏酸对坐骨神经结扎小鼠镇痛作用行为学和神经生化分析.docVIP

阿魏酸对坐骨神经结扎小鼠镇痛作用行为学和神经生化分析 　　[摘要] 研究阿魏酸慢性给药的镇痛作用，初步探讨其作用机制。采用热觉过敏和机械超敏实验，观察阿魏酸慢性给药对坐骨神经结扎（CCI）小鼠的影响。应用神经化学检测方法，观察阿魏酸慢性给药对单胺递质和单胺氧化酶活性的影响。与正常组相比，CCI小鼠的热觉和机械性痛阈都显著降低，而阿魏酸（10，20，40， 80 mg?kg-1， po）能显著逆转这一现象。进一步深入研究发现造成这种结果的原因是阿魏酸能剂量依赖性地增加海马、额叶皮层和杏仁核的5-HT和NE水平，并能抑制脑内MAO-A的活性。阿魏酸具有镇痛作用，其机制可能与抑制脑内单胺氧化酶活性，进而增加脑内胺类神经递质有关。 　　[关键词] 阿魏酸；疼痛；单胺递质；单胺氧化酶 　　[收稿日期] 2013-04-23 　　[基金项目] 浙江省中西医结合学会科研项目（2012LY011） 　　[通信作者] *潘建春，教授，硕士生导师，Tel：（0577E-mail：wenzhoupan2003@163、com 神经痛是神经科常见症状之一，其特征是对有害刺激过度响应（痛觉过敏）、对早前无害的刺激产生疼痛感（痛觉超敏）以及自发疼痛[1]。临床上有许多患者对于典型镇痛药（比如阿片类和非甾体类抗炎药）产生耐受性，因此寻找更为有效的镇痛药物显得尤为重要。而抗抑郁药（如去甲替林）和抗惊厥药（如加巴喷丁）虽然作为一线药物，但是却未能很好地减轻患者的神经痛症状，并且还伴有不良反应[2-3]。随着天然药物在精神病治疗中使用的越来越多，而且其具有多靶点、低毒的优点，因此，从天然植物中开发安全有效、毒副作用小、生物利用度高的天然药物用于镇痛成为这一领域的研究方向。 　　阿魏酸（ferulic acid，3-甲氧基-4-羟基肉桂酸），是植物界广泛存在的一种低毒酚酸，它是阿魏、川芎、当归、升麻、木贼等多种中药的有效成分之一，在细胞壁与多糖和蛋白结合，形成细胞骨架。由于结构中的酚羟基，其具有很强的抗氧化活性，对过氧化氢、超氧自由基、羟自由基、过氧化亚硝基都具有强烈的清除作用[4]。阿魏酸能增加抑凋亡基因（Bcl-2）表达，减少促凋亡基因（Bax）表达，从而抑制氧化损伤，起到抗氧化作用。阿魏酸能明显抑制肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞白介素1β（IL-1β）的升高，表明其通过抑制炎症反应而发挥作用，维护缺血区域神经元的基本结构和功能。程斯[5]研究发现，氟桂利嗪与阿魏酸钠联用治疗偏头痛的效果较单用氟桂利嗪有效率高，表明阿魏酸具有一定的镇痛作用。而坐骨神经结扎（chronic constriction injury of sciatic nerve，CCI）模型是目前公认的神经病理性疼痛模型，因此本研究就阿魏酸对CCI模型小鼠行为学的影响来探讨阿魏酸的镇痛作用及其初步机制。 　　1 材料与方法 　　1、1 药品和试剂 阿魏酸、盐酸丙咪嗪、5-羟色胺（5-HT）、去甲肾上腺素（NE）、多巴胺（DA）、5-羟基异丁酸（5-HIAA）及二羟苯乙酸（DOPAC）均购于 Sigma 公司（美国）。阿魏酸（10，20，40，80 mg?kg-1）溶解于双蒸水，灌胃给药；丙咪嗪（imipramine，10 mg?kg-1）用双蒸水溶解，腹腔给药。 　　1、2 仪器 BS-11OS 型电子分析天平（北京赛多利斯天平有限公司）；WH-966漩涡混合器（太仓市科教器材厂）；Bio-RAD 680酶标仪（美国伯乐公司）；Agilent 1100高效液相仪（美国Agilent公司）；ANTEC电化学检测器（荷兰安泰克公司）；64R超速冷冻离心机（BECKMAN COULTER公司）；RF-5301PC型荧光分光光度计（日本岛津公司）；JY92-2D超声波细胞粉碎机（宁波新芝生物科技股份有限公司）；超低温保存箱（海尔公司）。 　　1、3 动物 雄性ICR小鼠64只，SPF级，体重25～30 g，由温州医学院动物中心提供，许可证号SCXK（浙）2010-0044。饲养条件：6 只/笼，室温（24±1） ℃，湿度（50±10）%，自然光照，昼夜节律，自由摄食饮水。所有动物适应环境5 d后开始实验，实验前禁食10 h，自由饮水。随机分成8组，分别为空白对照组、假手术组、CCI组[溶媒组、阿魏酸组（10，20，40，80 mg?kg-1）、丙咪嗪组（10 mg?kg-1）]，每组8 只动物。 　　1、4 CCI模型建立[6] 小鼠在戊巴比妥麻醉下，于右侧大腿中部切开，暴露坐骨神经，于坐骨神经干上用4-0铬制羊肠线结扎3道松紧适中的结，以不影响神经的血液循环为原则，每2道之间间隔1 mm，然后将链霉素洒在切口上，逐层缝合切口。假手术组仅暴露坐骨神经不作结扎。 　　1、5