实验二_cam电泳 凝胶层析_yql.pptVIP

电泳 电泳分离蛋白质的原理? 按泳动快慢顺序分为：清蛋白、α1、α2、β、γ-球蛋白。 定量分析：剪开，氢氧化钠溶液洗脱，比色计进行比色，计算各种蛋白的相对百分比含量。 三、操作步骤： 1、装置电泳箱。 2、点样：浸于巴比妥溶液中的乙酸纤维素薄膜，滤纸轻轻吸干----半干燥态。铅笔标记；点样器沾适量新鲜血清，垂直点样。 3、放入电泳槽。保持膜直；不下垂。 4、通电：150伏，50-60min。断电后，取膜。 5、染色：氨基黑染色10min。 6、浸洗：浸洗液浸洗3次，每次5-10min。 实验13 凝胶柱层析分离血红蛋白和DNP-胰糜蛋白酶 掌握凝胶层析的原理、熟练掌握实验操作。 离子交换层析 ＊大分子物质直径大于凝胶网孔，不能进入凝胶内部，只能沿着凝胶颗粒间的间隙随流动相向下移动，流程短、流速快，首先流出层析柱。 ＊小分子物质直径小于凝胶网孔，能自由出入凝胶网孔，因而流程长、洗脱时间长，最后流出层析柱。 葡聚糖凝胶（Sephadex) 加样与洗脱 凝胶的再生 层析实验讨论 试述G值与交联度的关系，如何根据柱床体积估算SP凝胶干粉用量？ 如果凝胶表面不平整，采用什么方法使其平整？ 为什么加样的时候，胶柱表面的水层只保持1~2mm? 加样后可以立刻加水吗？为什么？ 柱子不垂直会有什么后果？怎样算垂直？ 电泳实验讨论 讨论影响电泳结果分辨率的主要操作？ * * 目