银杏缓释制剂体外释放度药理指标评价方法研究.docVIP

银杏缓释制剂体外释放度药理指标评价方法研究 　　[摘要]以银杏提取物为模型药物，初步探讨以药理指标评价缓释制剂的可行性。选择抗氧化和抗血小板聚集2个药理指标，考察影响因素，建立药理指标测定方法，并用该方法测定银杏制剂体外溶出液的生物效应，绘制时间-药理指标效应曲线，与时间-累积释放度曲线比较。试验显示体外释放度评价中药理指标与成分指标有较好相关性，初步说明药理指标可以用来评价中药缓释制剂。 　　[关键词]银杏；抗氧化；抗血小板聚集；药理指标评价 　　中药缓控释制剂自开始研究以来取得不少进展，但目前除中药单体化合物缓释制剂外，尚无能代表中药特点的中药有效部位和中药复方缓释制剂成功上市，其原因在于中药缓控释制剂研究方法学上存在重要缺陷。药效物质不明、化学成分种类结构复杂，阻碍了其评价体系的建立，进而影响到中药缓控释制剂的开发[1]。因此作者认为，评价理论的创新和发展是突破中药缓控释制剂开发瓶颈的关键问题。如何避开药效物质不明、量化研究不系统的不足，选择一种新思路建立评价体系是解决问题的关键[2]。中药多组分、多靶点、多途径、多环节、整体性的特点，使其疗效是多组分作用的结果，单一组分或少数组分难以反映整体的作用，因此考虑以药理指标这一新的评价方式解决中药缓控释制剂药效物质不明且不能仅以单一成分来评价制剂的问题。被观测的药理指标应与药物的治疗作用或毒性作用有直接关系或高度相关性。所选药理指标能与药物疗效有良好的量效关系并有较好的灵敏度来反应药量变化所引起的药效变化[3]。 　　本试验选择银杏提取物骨架片作为模型药物，以银杏黄酮和银杏内酯为成分指标，以与银杏提取物治疗作用有高度相关性的抗氧化和抑制血小板聚集作用为药理指标，探讨其中的量效关系及影响检测的因素，建立药理指标测定标准，并将所建方法应用在银杏制剂体外释放评价上，考察体外溶出液的成分指标与药理指标的相关性，为以药理指标作为银杏制剂的质量控制手段的研究提供理论依据。 　　1 材料 　　LC-20AT高效液相色谱仪（日本岛津）；SPD-20A检测器（日本岛津）；CX-250型超声波???洗机（北京市医疗设备二厂）；pHs-25酸度计（上海伟业仪器厂）；SHZ-III循环水真空泵（上海亚荣生化仪器厂）。 　　银杏叶提取物（GBE，含银杏苦内酯≥6%，总黄酮≥24%，江苏康缘药业有限公司）；槲皮素、山柰酚、异鼠李素、银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C、白果内酯均购自中国食品药品检定研究院，批号分别为10081-200907，10081-200808，110860-200608，110862-201009，110863-200508，110864-200304，110865-200404；血小板活化因子（platelet activating factor，PAF，Sigma公司）；小牛血清蛋白（bovine albumin serum，BAS）、质量分数为0.25%的Tris-NaCl缓冲液（pH 7.6）、乌来糖（拜尔迪公司）；甲醇（色谱纯，德国Merck）；磷酸（天津光复精细化工厂）；娃哈哈纯净水。 　　家兔，雌雄兼用，体重2.0～2.5 kg，由北京维通利华实验动物公司提供，合格证号为0296566。 　　2 方法与结果 　　2.1 含量测定 　　2.1.1 银杏提取物中黄酮类成分的含量测定 色谱条件：日本岛津ODS-3色谱柱 （4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相甲醇-0.4%磷酸（53∶47），流速1 mL·min-1；检测波长360 nm；柱温25 ℃，相关色谱图见图1。槲皮素、山柰酚、异鼠李素的回归方程分别为y=4 912 196 352.69x+687.88，r=1.000，线性范围0.152～2.432 g·L-1；y=3 049 178 564.68x+223.06，r=1.000，线性范围0.15～2.4 g·L-1；y=6 900 141 995.41x+9 307.89，r=1.000，线性范围0.10～1.608 g·L-1。银杏黄酮质量分数为26.3%。 　　2.1.2 内酯类成分含量测定方法 色谱条件：日本岛津ODS-3色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；柱温35 ℃；流动相四氢呋喃-甲醇-水（10∶25∶65），流速1 mL·min-1；ELSD参数：雾化温度60 ℃，漂移管温度90 ℃，增益6，此条件下样品的HPLC图见图2。银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C、白果内酯的回归方程分别为y=3 574 684 254.75x+232.35，r=0.999，线性范围0.102～1.632 g·L-1；y=3 275 438 974.21x+112.77，r=0.999，线性范围0.049～0.784 g·L-