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浅析铁皮石斛原球茎增殖培养基配方优化 　　摘 要：铁皮石斛为兰科多年生附生草本植物，但是由于人类的大规模采集，在其需求量急剧增长的情况下，人工的培育变得尤为重要，通过研究铁皮石斛的原球茎增殖的培养基配方，发现1/2MS+28g葡糖糖+1g活性炭+7g琼脂+1.5mg/L6-BA+0.5mg/LNAA最适合于铁皮石斛原球茎的增殖。 　　关键词：铁皮；石斛原球茎增殖配方；优化 　　中图分类号：567.2 文献标识码：A 　　铁皮石斛（Herba Dendrodii Officinalis），兰科多年生附生草本植物。生于海拔达1600m的山地半阴湿的岩石上，喜温暖湿润气候和半阴半阳的环境，不耐寒。一般均能耐-5℃的低温。石斛可分为黄草、金钗、马鞭等数10种，铁皮石斛为石斛之极品，由于其具有药用价值和保健功能。是历代宫廷贡品，其价值就是药用植物界的“大熊猫”，名列中华九大仙草之首野生“铁皮”石斛是国家重点二级保护的珍稀濒危植物，它因表皮呈铁绿色而得名[1]。铁皮石斛具有独特的药用价值，以其茎入药，中药名：石斛，属补益药中的补阴药[2]。 　　自古以来，人们用药都是依靠上山采挖收集野生植株，而野生石斛的繁殖率又极低，人们如此只采挖野生的石斛却不人工种植，导致石斛中的上品——铁皮石斛逐渐枯竭并引发其价格一涨再涨！目前，国际市场1kg铁皮石斛干品高达1000～3000美元，鲜品收购价1kg仍在2000元以上。铁皮石斛的逐渐枯竭，再加上开发生产其药用、保健、美容产品开发商家的逐年增加，导致铁皮石斛的成品几乎已无处收购、有价无货，人工种植迫在眉睫。随着科技的发展和社会的进步，人们也认识到这个严峻的问题，也有人员专门从事人工种植铁皮石斛，但是碍于石斛的生长周期长，生长环境要求高，人工种植产业发展前景不是很乐观。同时，许多国内外学者也利用铁皮石斛种子和茎尖来进行组织培养的研究，成果可观，但还是存在试管苗污染严重、增殖系数低、试管苗茎细弱、移栽成活率不高等诸多原因，影响了铁皮石斛试管苗快繁和大规模的工厂化种植。在石斛组织培养过程中，石斛原球茎增殖又十分关键。通过诱导石斛产生大量原球茎，将所得的原球茎切分进行分化形成大量丛生芽，再将丛生芽分???，培养成小苗，小苗生长成一定高度的植株就可以炼苗种植，而达到快速繁殖的目的。用铁皮石斛茎段诱导出的原球茎通过在不同的基本培养基、碳源、激素水平、添加物及培养方式进行增殖培养，观察其生长情况。光照时间、强度恒定，上午8：00～11：30，下午14：30～17：30，光照强度1000～1600lx，温度（25±1）℃。以找出最适合铁皮石斛原球茎增殖的培养基以及培养方式，为人工种植铁皮石斛提供技术支持和种源[3]。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　铁皮石斛原球茎购买于昆明生物公司植物组织培养中心。铁皮石斛多个原球茎聚集呈圆锥状，其顶端有鳞片状的叶原基突起，呈淡绿色，似芽状，尚未分化出真叶。 　　1.2 方法 　　选取同一批次接且生长旺盛尚未分化的原球茎，将其切割成直径为1.5～2cm的不规则团块。 　　1.2.1 基本培养基的筛选 　　选取切割的原球茎团块接种在MS、1/2MS基本固体培养基上，每种基本培养基接种13瓶，每瓶接种5～6个原球茎团。培养基并附加蔗糖28g/L，琼脂7g/L，活性炭1g/L。35d后观察。 　　1.2.2 不同浓度的6-BA筛选 　　选取切割的原球茎团块接种在MS、1/2MS为基本培养基，每种培养基接种13瓶，每瓶接种5～6个原球茎团，附加28g/L蔗糖，活性炭1g/L。NAA 0.5mg/L，6-BA分别为0、0.5mg/L、1.0mg/L、1.5mg/L、2.0mg/L、2.5mg/L、3.0mg/L的情况下培养，45d后观察。 　　1.2.3 不同浓度的NAA筛选 　　选取切割的原球茎团块接种在MS、1/2MS为基本培养基，每种培养基接种13瓶，每瓶接种5～6个原球茎团，附加蔗糖28g/L，活性炭1g/L，BA 0.5 mg/L，NAA分别取0、0.5mg/L、1.0mg/L，1.5mg/L、2.0mg/L、2.5mg/L、3.0mg/L的情况下培养。 　　1.2.4 不同天然添加物质的筛选 　　选取切割的原球茎团块接种在MS、1/2MS为基本培养基，每种培养基接种13瓶，每瓶接种5～6个原球茎团，附加28g/L蔗糖，活性炭1g/L。香蕉提取液、马铃薯提取液和铃薯汁均为200g/L。45d后观察。 　　1.2.5 培养基 　　选取切割的原球茎团块接种在MS、1/2MS为基本培养基，每种培养基接种13瓶，每瓶接种4～5个原球茎团，有光照和无光照做比较。 　　2 结果与分析 　　2.1 培养基对原球茎增值的影响 　　培养基作为原球