生物化学试验教学大纲-湖北大学生命科学学院.DOC

湖北大学生物化学实验（课程代码）实验教学大纲（第2版）生命科学学院 生化教研室2010年7月前 言课程名称：生物化学 实验学时：64适用专业：生物科学、生物技术、生物工程 课程性质：必修实验课程简介生物化学实验课程是生命科学本科实验教学的一个重要组成部分，实验性质有基础性、综合性、设计（创新）性三层次，实验项目数共25个，按照学时要求完成必做与选做实验。在实验过程中要求学生自己动手，独立观察并完成实验报告，注重培养学生创新思维与能力。二、课程目的通过实验教学可以加强学生对生物化学基本知识和基本理论的理解，掌握现代生物科学与技术的实验原理与技能；同时，通过实验培养学生独立观察、思考和分析问题、解决问题和提出问题的能力，养成实事求是、严肃认真的科学态度，提高学生的科学素养以及敢于创新的开拓精神。 三、考核方式及成绩评定标准生物化学实验课程考核采用笔试与操作能力二种方式；期末成绩评定标准为：平时成绩60%；笔试10%；操作能力30% 。四、实验指导书及主要参考书陈均辉等，《生物化学实验》科学出版社，2003年4月第三版蒋立科等，《生物化学实验设计与实践》高等教育出版社， 2007年10月 第1版五、实验项目实验项目一览表序号实验项目名称实验类型实验学时必做/选做实验一蛋白质及氨基酸的呈色反应与甲醛滴定法测定氨基氮验证性3必做实验二氨基酸的分离鉴定――纸层析法验证性3必做实验三醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白验证性3必做实验四双缩脲法测定蛋白质浓度验证性3必做实验五酪蛋白的制备与定量测定综合性4必做实验六影响酶促反应的因素验证性3必做实验七枯草杆菌蛋白酶活力的测定验证性3必做实验八米氏常数的测定验证性3选做实验九维生素C的定量测定验证性3必做实验十核黄素的荧光光度定量测定验证性3必做实验十一植物组织中蔗糖酶的提取与酶活力测定综合性5选做实验十二紫外分光光度法测定核酸含量验证性3选做实验十三腺苷三磷酸的测定（电泳法）验证性3选做实验十四酵母核糖核酸的提取、鉴定与定量分析综合性5必做实验十五糖的旋光性和变旋现象验证性3必做实验十六还原糖的测定—3，5-二硝基水杨酸法验证性3必做实验十七脂肪酸的β—氧化作用验证性3必做实验十八大豆中粗脂肪含量测定和组分分析综合性5选做实验十九卵磷脂的提取、鉴定与定量测定综合性5必做实验二十阳离子交换树脂摄取氯化钠验证性3必做实验二十一离子交换柱层析法分离氨基酸综合性4必做实验二十二发酵过程中无机磷的利用综合性4必做实验二十三乳酸脱氢酶活力测定综合性4选做实验二十四凝胶过滤法测定蛋白质分子量综合性4选做实验二十五脂蛋白的分离与鉴定—琼脂糖电泳综合性4选做合计64实验类型：演示性、验证性、综合性、设计性、其它实验一 蛋白质及氨基酸呈色反应与甲醛滴定法测定氨基氮（3课时）实验类型：验证性实验目的：学习几种常用的鉴定蛋白质与氨基酸的方法，掌握甲醛滴定法测定氨基酸含量的原理和操作要点。实验内容：1、茚三酮反应：（1）取两支试管分别加入蛋白质和氨基酸溶液1ml，再各加0.5ml0.1%茚三酮水溶液，混匀，沸水浴加热1-2min，观察颜色由粉色变紫红再变蓝。（2）在一小块滤纸上滴上一滴0.5%Gly溶液，风干后，再在原处滴上一滴0.1%的印三酮乙醇溶液，在微火旁烘干显色，观察紫红斑点的出现。2、黄色反应：向7个试管中分别按下表加入试剂，观察各管出现的现象，有的试管反应慢可略放置或用微火加热。待各管出现黄色后，于室温下逐滴加入10%氢氧化钠溶液至碱性，观察颜色变化。管 号1234567材 料（滴）鸡蛋清溶液4大豆提取液4指甲少许头发少许0.5%苯酚40.3%色氨酸40.3%酪氨酸4浓硝酸（滴）2440404443、甲醛滴定（1）标准Gly溶液的滴定。（2）计算：Gly氨基氮的回收率%=实际测得量∕加入理论值×100%4、未知浓度Gly溶液的滴定氨基氮（mg/ml）=（V未—V对）×NNaOH×14.008实验要求：要求仔细观察并记录实验现象，如颜色等变化，分析实验结果。 实验二 氨基酸的分离鉴定――纸层析法（3课时）实验类型：验证性实验目的：学习分配层析的原理；掌握氨基酸纸层析法的操作技术要点；以及氨基酸的呈色反应原理。实验内容：1、平衡：将展层剂置于层析缸中进行平衡。2、标记：取层析滤纸一张，在纸的一端距边缘2－3cm处用铅笔划一直线，在此直线上，每隔2－3cm做一记号（点样点）。3、点样：用毛细管将各氨基酸样品分别点在标记的位置上，干后在原来点样位置再点一次（可用吹风机吹干，但要控制温度不能太高）。注意，每点的扩散直径不能超过3mm。4、展层：用线将滤纸缝成筒状（用透明胶粘也可以），注意滤纸的两边不能接触。缝好后，将滤纸直立于层析缸中。（点样端在下，展