Wnt―1蛋白在宫颈鳞癌及癌前病变中表达及意义.docVIP

Wnt―1蛋白在宫颈鳞癌及癌前病变中表达及意义 　　[摘要] 目的 探讨Wnt-1蛋白在子宫肌瘤组织，宫颈病变组织（上皮内瘤变和宫颈鳞癌）中的表达及意义。 方法 取同期因子宫肌瘤行子宫全切的患者30例，宫颈上皮内瘤变患者（CIN）63例，宫颈鳞癌患者51例，术前均未接受放化疗，或其他治疗。用免疫组化SABC法对Wnt-1蛋白在正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变（CIN）组织和宫颈鳞癌组织中的表达水平进行检测。 结果 宫颈病变组Wnt-1表达明显高于子宫肌瘤组，差异有统计学意义（P 　　[关键词] 宫颈上皮内瘤变；宫颈癌；Wnt经典信号通路；Wnt-1蛋白；免疫组化法 　　[中图分类号] R737.3 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2013）04（b）-0042-02 　　宫颈癌是危害女性生命健康的恶性肿瘤之一，在导致妇女死亡的恶性肿瘤中居排第2位，仅位于乳腺癌之后[1]。近几年来，全世界宫颈癌的发病率呈现明显上升及低龄化趋势。Wnt蛋白在Wnt信号通路中起到重要作用，通过与细胞膜上的受体结合，从而使胞内信号传导分子活化，进而调节靶基因的表达，参与经典Wnt信号通路的蛋白质主要有Wntl、Wnt3a和Wnt8。采用免疫组化SABC法，检测Wnt-1蛋白在宫颈病变组（宫颈上皮内瘤变、宫颈鳞癌组织）和正常宫颈组织（子宫肌瘤）中的表达，进而探讨Wnt蛋白在宫颈病变进展中的作用。 　　1 材料与方法 　　1.1 标本来源 　　取2011年8月～2012年10月山西省肿瘤医院病理科妇科手术切除的子宫颈鳞癌组织蜡块51例、宫颈上皮内瘤变组织63例（低度病变组28例，高度病变组35例），随机选取正常子宫颈组织蜡块（同期因子宫肌瘤而非子宫颈病变行子宫全切术）30例作为对照，年龄为25～72岁，平均（36.5±7.5）岁。所有患者均未经放化疗，术后均经病理证实。各组一般情况差异无统计学意义。 　　1.2 主要试剂 　　兔抗人Wnt-1多克隆抗体购为北京博奥森生物技术有限公司产品，二抗鼠抗兔即用型SABC试剂盒为武汉博士德生物工程有限公司产品。 　　1.3 实验方法 　　切片常规脱蜡，水化，PBS洗两次各5分钟，配置3%H2O2，抗原修复，PBS洗5 min。滴加正常山羊血清封闭液，甩去多余液体，滴加一抗（Wnt-11∶150）4℃过夜，37℃复温，PBS洗3次，每次2 min，滴加生物素化二抗，PBS洗2 min×3次，滴加试剂SABC，PBS洗5 min×4次，DAB显色，苏木素复染，盐酸酒精分化，脱水、透明，封片，PBS代替一抗做阴性对照。 　　1.4 阳性结果判定 　　经免疫组化分析，Wnt-1蛋白主要定位于细胞质，阳性染色以细胞质出现棕黄色颗粒为标准。分级标准，阳性细胞数≤2%：0分；2%～20%：1分；21%～50%：2分；≥50%：3分。着色程度，无着色：0分；淡黄色：1分；棕黄色为2分。最后得分为阳性细胞数以及着色程度相加值，阴性（-）：≤1.9分；弱阳性（+）：2.0～2.9分；阳性（++）：3.0～3.9分；强阳性（+++）：≥4分。 　　1.5 统计学处理 　　数据统计采用SPSS 16.0软件包检验。Wnt-1蛋白表达数据为等级资料，差异比较采用秩和检验，P 　　大量文献表明经典的Wnt信号途径异常在肿瘤的发生发展中起重要作用，尤其是对于结肠癌的研究报道较多，近年来对Wnt-1蛋白在胃癌中也有相关报道，韩向春等[8]报道，在经典Wnt信号通路中， Wnt1在胃癌中高表达， 与正常组织相比， 差异具有统计学意义。但对于该信号通路各个分子在引起子宫肿瘤的过程中所起作用的研究并不多见， 通过对其作用的研究，进一步明确其相关机制，未来可将它作为治疗宫颈癌的重要靶点， 通过对该途径的干预调控从而达到治疗肿瘤的目的。这可以成为未来的一个研究热点。本研究30例子宫肌瘤组织中，Wnt-1蛋白阳性率较低，而在宫颈低度病变组织、宫颈高度病变组织、宫颈鳞癌组织中，其阳性率则逐渐增加。由于样本的不足，本实验无法探讨Wnt-1蛋白在宫颈腺癌组织中是否也有此表达倾向。 　　[参考文献] 　　[1] Parkin D M，Bray F，Ferlay J，etal. Estimating the world cancer burden：Globocan 2000[J]. Int J Cancer，2001，94（2）：153-156. 　　[2] 赵苏云，李美蓉. Wnt信号通路在子宫肌瘤中的表达[J]. 山西医药杂志，2009，38（5）：410-411. 　　[3] Dimitrova IK，Richer JK，Rudolph MC，et al. Gene expression profiling of multiple lei