乌司他丁多次给药对延迟心肺复苏大鼠海马谷氨酸含量干预作用.docVIP

乌司他丁多次给药对延迟心肺复苏大鼠海马谷氨酸含量干预作用 　　DOI：10.3760/cma.j.issn.1671-0282.2014.06.012 　　基金项目：广东省天普研究基金资助课题 　　作者单位：832002 新疆石河子，石河子大学（姜银松，方?琦）；兰州军区乌鲁木齐总医院 ICU（李新宇）；滨州医学院烟台附属医院急诊科（王占青） 　　通信作者：李新宇，Email163.com 　　心肺复苏成功率不断提高[1-2]，但自主循环恢复（ROSC）后脑复苏质量却不尽人意，心肺复苏的关键取决于脑功能的恢复[3-5]。王姗姗等[6]研究表明乌司他丁（UTI）对心肺复苏后大鼠脑功能的预后有益，但目前动物实验多于心脏骤停（CA）后即刻进行心肺复苏（CPR）， 而患者心脏骤停到实施CPR常需几分钟甚至更长时间；为更接近临床，本实验在大鼠心脏骤停后3 min进行延迟CPR，在ROSC后连续两次给予UTI干预，探讨UTI对延迟复苏大鼠海马的保护作用及机制。 　　1 材料与方法 　　1.1 动物、仪器、试剂 　　健康Sprague-Dawley雄性大鼠110只，8～9周龄，体质量350～450 g，购自新疆维吾尔自治区疾病控制中心动物研究所，饲养于兰州军区乌鲁木齐总医院动物实验科SPF级动物房；MP50多参数监护仪（德国飞利浦）；HX-200S动物呼吸机（成都泰盟科技有限公司）；milli-Q超低有机物超纯水机制备超纯水（美国Millipore公司）；分析天平（Sartorius，BS 110S，d=0.1 mg）；高效液相色谱仪（美国Waters ）；戊巴比妥钠（上海化学试剂厂）；注射用乌司他丁（广东天普生化医药有限公司，批号：；谷氨酸标准品（中国计量科学研究院）；AccQ?Fluor 氨基酸衍生试剂盒（美国Waters 公司）。 　　1.2 实验方法 　　1.2.1 分组 随机数字表法将大鼠分为假手术对照组（S组，n=35）：行麻醉、气管插管及血管穿刺；乌司他丁复苏组（UTI组，n=35）：窒息后常规复苏，ROSC后2 min内和1.5 h经由股静脉推注乌司他丁（10万U/kg）；生理盐水复苏组（NS组，n=35）：ROSC后相同时间推注等剂量生理盐水。复苏组分为ROSC后0.5 h、1 h、1.5 h、2 h、2.5 h、4 h、6 h 7个亚组，S组气管插管、血管穿刺后同上相同时间点分7个亚组，各亚组5只。 　　1.2.2 模型制作 本实验参考文献[7]并加以改进。大鼠称质量，3%戊巴比妥钠（35 mg/kg）腹腔注射麻醉，仰卧固定。正中切口，暴露气管，行气管插管。沿腹股沟暴露双侧股动脉鞘，剥离左侧股静脉、右侧股动脉，分别结扎血管远心端，24G套管针向近心端穿刺置管后固定，肝素化（500 U/kg）。连接压力换能器，连接心电肢体导联，至监护仪正常显示股动脉平均动脉压、心电图。伤口处敷蘸生理盐水纱布。稳定10 min后，呼气末气管夹闭诱导窒息（5±1）min致CA，继续延迟3 min[自夹闭气管时计起为（8±1）min]方行常规复苏：开放气道，接小动物呼吸机（呼吸频率80次/min，潮气量6 mL/min），于剑突处胸外按压（频率160次/min），同时经股静脉推注肾上腺素20 μg/kg，观察心电图及平均动脉压变化，ROSC后2 min、1.5 h分别给予UTI组推注乌司他丁，NS组推注等剂量生理盐水。 　　1.2.3 CA标准 心电图呈室颤、停搏或电机械分离；股动脉平均动脉压60 mmHg，持续时间超过10 min；动物皮肤黏膜发绀明显减轻。 　　1.2.5 退出实验标准 抢救时间超过2 min，自主循环仍无法恢复；虽自主循环恢复，但其后仍有血压下降或心律失常需追加肾上腺素、胸外按压。 　　1.2.6 药物干预及标本留取 10万单位/安瓿乌司他丁溶于2 mL的0.9%注射用生理盐水，每次推注剂量为10万U/kg。UTI组中的0.5 h、1 h、1.5 h三个亚组在ROSC后2 min内单次推注UTI，2 h、2.5 h、4 h、6 h四个亚组两次推注UTI（ROSC后2 min内+ROSC 1.5 h），按各自设定时间点断头；NS组推注等量生理盐水，余处理同UTI组；S组按设定时间点断头。 　　1.2.7 检测方法 组织学检测：低温冰台上断头剥离海马后，于4%多聚甲醛中固定24 h。脱水、透明、浸蜡及包埋，海马组织5 μm厚度切片，行HE（Hematein Eosin）染色。反相-高效液相荧光检测：氨基酸对照品配制、衍生试剂配制后，进行氨基酸对照品衍生化反应、大鼠海马组织预处理及衍生化反应，直至进样5 μL进行色谱分析。色谱条件为的流动相A： 称取7.4 g无