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辣椒花药培养影响因素研究 　　摘 要：以6种基因型辣椒的花蕾为材料，比较了不同基因型辣椒花蕾的消毒效果，辣椒基因型及花药接种量对花药培养的影响。研究结果表明，本试验的消毒方法获得了较好的消毒效果，3个基因型材料均未受污染，其他最高的污染率为23.08%；50%的基因型能诱导出胚状体，出胚率1.18%～1.38%，小果型的辣椒不能诱导出胚状体；所有基因型均能诱导出愈伤组织，出愈率17.65%～69.44%；花药接种量对花药愈伤组织诱导有影响，增大接种量，出愈率上升0.77%～13.67%，但对胚状体诱导影响不明显；在愈伤组织的继代培养中，接种量对其生长的影响因基因型不同而不同，所有基因型的愈伤组织在第一次继代培养中均不能分化出胚状体或不定芽。 　　关键词：辣椒；花药；胚状体；愈伤组织 　　中图分类号：S641.3 文献标识码：A 文章编号：1001-3547（2013）22-0019-04 　　辣椒（Capsicum annuum L.）是一种重要的蔬菜作物和调味品，在中国种植面积已超过130万hm2，位列世界之首。花药培养是人工产生单倍体的关键技术，通过花药培养单倍体途径加速亲本纯系的选育，提高亲本优异基因的聚合是目前辣椒育种的重要途径之一。辣椒花药培养研究开始较早[1，2]，国内外学者从培养基[3]、小孢子发育时期[5]、活性炭[6]、温光培养条件[7]等方面做过研究。花药培养技术虽有许多优势，但目前辣椒花药培养还有大量的具体问题需要探索，如辣椒花药培养胚状体的诱导效果随基因型的不同而存在很大差异，在实际应用中，需要对有价值的不同基因型的辣椒材料进行研究，以提高辣椒单倍体的诱导效率。本研究以不同果型和不同基因型的优良辣椒杂交F1代、优良辣椒品系花药为材料，研究其胚状体和愈伤组织诱导及继代生长的影响因素，以提高不同果型辣椒花药培养的出胚率、出愈率和愈伤组织的质量，推动这几个优良辣椒品系的花药培养在辣椒育种方面的应用。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验材料 　　供试材料有杂交种F1代植株花药，分别为Fk（M）×Fk（F）、Fk（F）×Fk（M）、1-8-3×1-8-8、HX-1×TW-1，另外2个基因型材料为1个不育系A和1个保持系B（A、B均由中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所提供）。 　　1.2 试验方法 　　①材料种植和采样方法 2010年8月中旬浸种催芽，在塑料育苗盘中育苗，9月中旬移栽辣椒苗定植于大棚中，11月下旬开始采样。采集萼瓣一致，长约3 mm的幼蕾，每株选取2～3个，采下后装入自封口塑料袋，随即放入装有冰块的泡沫箱中，然后带回实验室，放入4℃的冰箱进行低温预处理7 d。 　　②接种方法 接种当天，从冰箱中拿出花蕾材料，在室温中放置约1 h。然后于超净工作台上，先用75%酒精浸泡消毒约30 s后，用无菌水清洗1次，再用加有2～3滴吐温-80的0.1% HgCl2溶液浸泡消毒8～9 min，每2 min晃动一次使之与消毒液充分接触，最后用无菌水浸洗4～5次，倾倒无菌水，用镊子夹出，放在无菌滤纸上吸干水分后，剥出花药，接种至培养基上。 　　③培养方法 接种完毕后，将培养瓶放置培养箱中进行黑暗培养10 d，培养温度为30℃，再从培养箱中取出置光暗交替条件下培养，16 h光照/8 h黑暗，温度为（28±1）℃。 　　1.3 数据分析 　　接种 15 d 后统计并剔除有污染的花药培养瓶，期间观察和记录愈伤组织诱导和生长状况，接种40 d 后统计辣椒花药褐化数、胚状体和愈伤组织诱导情况，并计算花药污染率、褐化率及愈伤组织诱导率。 　　计算公式如下：污染率（%）= （污染花药数/接种花药总数）×100%；褐化率（%）=（花药褐化数/无污染花药总数）×100%；出胚率（%）=（诱导出胚状体的花药数/无污染花数总数）×100%；愈伤组织诱导率（%）=（愈伤组织发生数/无污染花药总数）×100%。 　　2 结果与分析 　　2.1 不同基因型辣椒花蕾的消毒效果比较 　　将不同基因型的辣椒花蕾用同一种方法进行消毒处理，接种后的部分花药在2～3 d后污染，但因基因型的不同受污染的情况有差异（表1）。6个辣椒品种中有一半未受污染，其中2个品种的污染率较低，最高的污染率为23.08%，这说明采用此消毒方法效果较好。另外说明在秋冬季采取辣椒的花蕾比较容易消毒。 　　2.2 基因型对辣椒花药愈伤组织和胚状体诱导的影响 　　将辣椒的花药接种至培养基10 d后，大部分花药在培养基上呈黄白色或黄绿色，没有发生褐变，且能够膨大生长，只有少数花药完全变成黑褐色死亡状；接种35 d后有些品种有很少量的胚状体形成；接种40 d后，大部分膨大生长的花药都能够形成白色愈伤组织，大部分的愈伤组织质地致密，表面有毛状物，少数较疏松，个别松散为颗粒透明状，而