不同地种源丹参组培快繁及再生苗性状差异比较.docVIP

不同地理种源丹参组培快繁及再生苗性状差异比较 　　doi：10.15889/j.issn.1002-1302.2016.10.024 中国论文网 /1/viewhtm　　摘要：建立不同地理种源丹参（四川、山东、河南）组织培养条件，比较其组培苗及大田栽种后植株间的生物学性状差异。以不同地理种源盆栽丹参茎尖嫩叶为外植体，经70%的乙醇处理10 s后，再用2%的NaClO溶液灭菌20 min效果较好，污染率仅为5%。叶片愈伤组织的诱导及继代增殖最适培养基为MS+2.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA，出愈率达到96.7%；芽分化的最佳激素条件为1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA；幼苗生根的适宜培养基为1/2MS+0.2 mg/L NAA+0.5 mg/L IBA，生根率为94%。结果显示不同地理种源丹参组培苗及大田栽培后植株间根部特征、株高、叶形及开花与否均有较大差异。这为进一步探索3个种源丹参根系分泌物的差异及其与品质形成的关系提供了依据。 　　关键词：丹参；组培快繁；植株再生；生物学性状 　　中图分类号： S567.5+30.43文献标志码： A文章编号：1002-1302（2016）10-0103-05 　　收稿日期：2015-08-13 　　基金项目：国家自然科学基金（编号。 　　作者简介：兰英，女，重庆人，硕士研究生，主要从事中药资源与开发利用研究。E-mail：961269730@。 　　通信作者：严铸云，教授，博士生导师，主要从事道地药材品质形成与调控研究。E-mail：cdtcmyan@126.com。丹参为唇形科鼠尾草属植物丹参（Salvia miltiorrhiza Bge.）的干燥根及根茎，具有活血化瘀、消肿止痛、养血安神的功能，是常用的重要中药[1]；广泛分布于四川、河南、山东、安徽、陕西等省区，具有较强的土壤适应性[2]。前期研究结果表明，不同产地丹参栽培中普遍存在连作障碍及病毒积累等问题，而其有效成分含量差异明显，这与其遗传特性有关[3-4]。本试验以3个不同地理种源的丹参植株为材料，利用组织培养具备繁殖速度快、脱除病毒且保证植株遗传稳定性等优势，建立山东临朐、河南方城、四川中江3个种源丹参的组培快繁体系，实现对3种不同丹参组培苗的快速繁殖，并将试管苗移栽于四川中江进行大田培育，比较其生物学性状的差异，为后期探索不同丹参遗传特性与其药材品质形成的关系提供依据。 　　1材料与方法 　　1.1试验材料 　　丹参种源于2012年12月分别采自四川省中江县石泉乡、山东省临朐县吕匣镇、河南省方城县拐河镇3个不同产区，根段繁殖，翌年开花后，经鉴定均为唇形科植物丹参（Salvia miltiorrhiza Bge.）。 　　1.2仪器与试剂 　　仪器：SW-CJ-1F 超净工作台（江苏苏净集团有限公司），JA5003电子天平（上海良平仪器仪表有限公司），MLS-3020自动高压灭菌锅（日本三洋公司），PHS-3C+ 酸度计（成都世纪方舟科技有限公司），MLR-350HT组培箱（日本三洋公司）。 　　试剂：MS培养基（杭州临安木木生物技术有限公司，批，6-BA（济南昊天科技发展有限公司，批，NAA（济南昊天科技发展有限公司，批，2，4-D（济南昊天科技发展有限公司，批，维生素B1（成都市科龙化工试剂厂 批，蔗糖（成都市科龙化工试剂厂，批，琼脂粉（成都市科龙化工试剂厂，批，蒸馏水。 　　1.3试验方法 　　1.3.1无菌外植体的获得取样前将丹参植株移至室内培养1周后，采取植株茎尖1～2片新叶，用无菌纱布包裹置于自来水下冲洗1 h。将冲好的嫩叶用无菌水洗涤5次后置于超净工作台中，先后用70%的乙醇和2%的NaClO溶液进行不同时间的灭菌处理，期间不断搅拌使叶片与消毒液充分接触[5-6]。最后用无菌水冲洗4次后切块接种于培养基上。1周后统计其灭菌后的生长状况及污染率，筛选出最佳的灭菌时间组合。污染率=污染数/接种数×100%[7]。 　　1.3.2丹参愈伤组织的诱导及增殖培养将灭菌好的嫩叶剪成约0.5 cm×0.5 cm的小块，并用解剖刀轻轻将其表面划伤，背接（背面向上）于附加不同浓度生长素（NAA、2，4-D）和细胞分裂素（6-BA）配比的MS培养基上（含蔗糖3%、琼脂0.7%，pH 5.8～6.0，121 ℃、1.1 kg/cm2条件下灭菌 15 min）。每种处理培养10瓶，每瓶接种3块，培养5 d后将无菌的组织块接入新的培养基上培养。于（25±2） ℃下黑暗培养，每隔5 d对其生长状况进行观察，20 d后统计