灭多威对MDEC―07114细胞周期及Cyclin―D1影响.docVIP

灭多威对MDEC―07114细胞周期及Cyclin―D1影响 　　摘要：为探讨灭多威对家蝇胚胎细胞系MDEC-07114细胞周期及细胞周期蛋白Cyclin-D1的影响，用流式细胞仪检测不同浓度灭多威对MDEC-07114细胞周期的影响，应用免疫组化S-P法（Streptavidin-perosidase）检测细胞周期蛋白Cyclin-D1表达。结果表明灭多威作用于MDEC-07114后，各浓度组G0/G1期升高，S+G2/M期细胞占比及PI降低；从灭多威1 mg/mL处理组开始Cyclin-D1表达出现降低，且随浓度的增加降幅增大。可见灭多威可以通过下调Cyclin-D1使细胞周期阻滞而抑制细胞生长。 　　关键词：MDEC-07114细胞；灭多威；细胞周期；Cyclin-D1 　　中图分类号：Q965.9 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）20-4949-02 　　Effects of Methomyl on Cell Cycle and Cyclin-D1 of MDEC-07114 Cell 　　LIU Liu，HE Li-fang，LIU Hui，HUANG Xue-gui，ZHANG Xi 　　（Department of Parasitology， Zunyi Medical College， Zunyi 563003， Guizhou， China） 　　Abstract： To investigate the effects of Methomyl on cell cycle and cyclin-D1 of MDEC-07114 Cell， experiments were conducted to measure the effects on cell cycle with flow cytometry and expression of cyclin-D with immunohistochemical S-P method. For the MDEC-07114 cell under Methomyl， the percentage of G0/G1 was increased while the percentage of S+G2/M and the cell proliferation index were obviously reduced at the all concentration-groups. From the 1mg/mL groups of Methomyl， the expression of cyclin-D1 was reduced with the increase of the concentration.Therefore， the growth of MDEC-07114 may be inhibited by reducing expression of cyclin-D1 to block cell cycle. 　　Key words： MDEC-07114 cell； Methomyl； cell cycle； Cyclin-D1 　　MDEC-07114是遵义医学院寄生虫学课题组自建的家蝇胚胎细胞系，灭多威为氨基甲酸酯类杀虫剂，对昆虫卵有杀伤作用，对家蝇也有毒杀作用，前期研究表明灭多威对体外培养的MDEC-07114细胞有抑杀作用[1]。家蝇抗药性问题日趋严重，寻找新的杀虫剂成为必然。昆虫细胞凋亡的研究是探讨昆虫杀虫剂作用机制、寻找昆虫防治新途径的探索和尝试。细胞凋亡与细胞周期阻滞有关[2-4]。本试验研究灭多威对MDEC-07114的细胞周期及细胞周期调控蛋白的影响，为新的昆虫防治方法提供思路。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 供试细胞 家蝇胚胎细胞系MDEC-07114，由遵义医学院寄生虫学教研室提供。 　　1.1.2 灭多威溶液 灭多威[含量99.9%，批号BW（E）060546] 购自北京恒元启天化工技术研究院，丙酮（分析纯）购自成都化学试剂厂。先用无血M3培养基溶解丙酮，配制成1%丙酮溶液，抽滤，4 ℃保存。然后用1%丙酮溶液溶解灭多威，混匀抽滤配成20 mg/mL灭多威母液，4 ℃保存。使用时用1%丙酮溶液稀释成不同浓度供试验用。 　　1.1.3 碘化丙啶溶液 将碘化丙啶（美国Sigma公司生产）溶于PBS中，终浓度为100 mg/mL，含RNase 100 μg/mL，4 ℃避光保存。 　　1.1.4 免疫组化S-P法试剂 SP-0023免疫组化染色试剂盒、DAB显色试剂盒、Anti-Cyclin D1均购自北京博奥森生物技术有限公司。 　　1.1.5 主要仪器 FACS Calibur流式细胞仪（