生物：5.《多聚酶链式反应扩增DNA片段》学案（2）（新人教版选修1）.docVIP

课题2 多聚酶链式反应扩增DNA片段学习目标：1、了解PCR技术的基本操作2、理解PCR的原理3、讨论PCR的应用重点：PCR的原理和PCR的基本操作难点：PCR的原理Ⅰ．基础知识PCR技术扩增DNA的过程，与细胞内DNA复制过程类似：1．细胞内DNA复制条件分析：条件组分作用模板DNA的两条单链提供复制的模板原料四种脱氧核苷酸合成DNA子链的原料酶解旋酶DNA聚合酶打开DNA双螺旋催化合成DNA子链能量ATP为解螺旋和合成子链供能引物RNA为DNA聚合酶提供合成的3’端起点2．细胞内DNA复制过程的解析：解 旋：解旋酶、ATP，DNA两条链打开，形成两条DNA单链。引物结合：在DNA单链3’端与DNA反向配对结合。DNA聚合酶结合：DNA聚合酶与模板链结合，标志着单链合成开始。子链合成：DNA聚合酶从引物3’端开始，将配对的脱氧核苷酸连接起来。后续加工：DNA聚合酶I将引物切去，并合成空缺处的DNA单链，再由DNA连接酶将不连续的DNA子链连接起来（半不连续合成。先导链，滞后链）子链合成特点： 。［思考］DNA分子能准确复制的原因有哪些？ 。3． DNA分子复制的人工控制解开螺旋：在 ℃时，DNA双螺旋打开，形成两条DNA单链，称为变性。恢复螺旋：在 ℃左右时，两条DNA单链重新形成双螺旋结构，称为复性。复制条件： 。反应场所： （自动温度周期性调节）。［思考］缓冲液相当细胞内的什么成分？（核基质）4．PCR的反应过程延伸 复性变性延伸 复性变性 变性：在 ℃时DNA解旋复性：在 ℃时引物与DNA单链结合延伸：在 ℃时合成DNA子链（两个引物间的序列）Ⅱ．实验操作（1） PCR反应体系：缓冲液、 ， 、 、两种RNA引物，水（2） 实验操作步骤①按照PCR反应体系配方配制反应液；②将PCR反应体系50μL用微量移液器转移到微量离心管（0.5mL）中；③将微量离心管放到PCR仪中；④设置PCR仪的工作参数。⑤DNA在PCR仪中大量扩增。2．4 水浴法：将微型离心管依次在 ℃、 ℃、 ℃的恒温水浴锅中循环处理相应时间。3．实验注意事项（1）避免外源DNA污染：所用仪器、缓冲液、蒸馏水等使用前高压灭菌。（2）缓冲液和酶分装成小份，－20℃低温保存。（3）每添加一种反应成分，更换一个移液器的枪头。（4）混匀后离心处理，使反应液集中在离心管底部。（三）课堂总结、点评多聚酶链式反应扩增DNA片段多聚酶链式反应扩增DNA片段PCR原理DNA的复制需要酶、原料、能量、引物DNA的变性和复性受温度影响PCR过程变性复性延伸操作步骤配制PCR反应体系移入离心管放入PCR设置工作参数DNA扩增测定含量稀释调零测定并读数计算（五）巩固练习1．DNA分子复制时，解旋的两条链中（ ）A仅一条作为复制模板 B两条链作为模板并复制出两个不同的DNA分子C两条链作为模板并复制出两个相同的DNA分子D两条链作为模板，各自合成一条子链，然后两条母链重新结合为原来的双螺旋分子，两条新链结合成一个全新的DNA分子2.下列关于DNA复制过程的正确顺序是（ ）①互补碱基对之间氢键断裂②互补碱基对之间形成氢键 ③DNA分子在解旋酶的作用下解旋 ④以解旋后的母链为模板进行碱基互补配对 ⑤子链与母链盘旋成双螺旋状结构A①③④②⑤ B①④②⑤③ C①③⑤④② D③①④②⑤3.下列各项过程中，遵循“碱基互补配对原则”的有（ ）①DNA复制②RNA复制③转录④翻译⑤逆转录A①②③④⑤ B①②③④ C①②③⑤ D①③④⑤4.实验室内模拟生物体DNA的复制必需的一组条件是（ ）①酶 ②游离的脱氧核苷酸 ③ATP④DNA分子 ⑤mRNA ⑥tRNA ⑦适宜的温度 ⑧适宜的酸碱度A①②③④⑤⑥