检验仪器分第二章-显微镜.ppt

* * * * * * * * * * * 计算机辅助精子分析仪（computer-aided semen analysis，CASA）是计算机技术和图像处理技术结合发展起来的一项 精液分析技术，主要包括 灰度识别和DNA荧光识别 两种方式。 三、计算机辅助精子分析仪 返回目录 （一）工作原理 灰度识别CASA仪器分析流程如图: 连续拍摄 获取精子运动图像并存入计算机储存系统 图像储存 精子识别 关联运算 运动参数计算 输 出 确定各图像中精子的位置、大小和数量 确定各精子的运动方向、距离和轨迹 计算精子运动参数指标 输出所有各项参数和图形 返回目录 硬件系统主要有显微摄像系统、图像采集系统、温控系统及微机处理系统等。 由硬件系统和软件系统组成： 软件系统是用功能软件对图像信号进行全面系统地加工处理，获得的数据可打印输出或存储。 （二）基本结构和功能 返回目录 曲线速度(VCL) 平均路径速度(VAP) 直线运动速度(VSL) 直线性(LIN) 精子侧摆幅度(ALH) CASA软件主要参数： 前向性(STR) 摆动性(WOB) 鞭打频率(BCF) 平均移动角度(MAD) 运动精子密度 返回目录 （二）基本结构和功能 （三）仪器的性能评价 灰度识别CASA： 优点 缺点 1．客观、高效、高精度 2．提供精子动力学参数的量化数据 3．容易实现标准化和实施质量控制 1．受标本其他细胞和非细胞颗粒影响 2．不能区分“死”精子和“活”精子 3．要求精子密度（20～50）×106／ml 4．缺乏对精子群体了解 返回目录 （三）仪器的性能评价 荧光染色识别CASA： 优点 缺点 1．准确区分“死”精子和“活”精子 2．可进行多项检查，如精子DNA完整性等 3．提供精子动力学参数量化数据 1．荧光染剂操作不当影响精子活力分析 2．对畸形精子的识别还存在缺陷 返回目录 （四）仪器的使用 具体使用流程见图： 返回目录 开 机 接通电源，打开计算机辅助精液分析系统 输入信息 加 样 分 析 打印报告 输入患者信息及精液理学检查结果 系统进入自动分析状态，图像显示精子分割图像并进行运动分析，3类参数指标 分析结束，根据需要打印分析结果 液化精液，滴入计数池，点击“活动显示”菜单，调焦显示待测标本的精子运动图像。 (五) 仪器的维护与常见故障 维护与保养 仪器使用前精液必须液化完全 保证仪器清洁，干燥冷却后方可再次通电工作 长期不用应拔掉电源插头，放置阴凉干燥处 常见故障处理 视频窗口无图像 图像模糊不清 不能打印检查报告 返回目录 整合技术形成专用仪器 第七节 显微镜的临床应用进展 显微镜的发展主要表现为： 变化光学特征成像 复合应用光学成像技术，进一步显示立体结构图像 极大提高分辨率 返回目录 一、激光扫描共聚焦显微镜 激光扫描共聚焦显微镜是利用激光作为荧光的激发光，通过扫描装置对标本进行连续扫描，并通过空间共轭光阑（针孔）阻挡隔离焦平面光线而成像的一种显微镜。 返回目录 工作原理： 一、激光扫描共聚焦显微镜 利用单色激光束经过照明针孔扫描形成点光源，对标本内焦平面逐点、逐行、逐面快速扫描成像，标本上的被照射点在检测器的检测针孔处成像，由检测针孔内CCD或PMT逐点或逐线接收，经计算机处理得到图像。 返回目录 二、电子显微镜 返回目录 1．透射电子显微镜 成像原理： 是把经加速和聚集的电子束投射到非常薄的样品上，电子束透过样品时，电子与样品中的原子碰撞而改变方向，从而产生立体角散射。散射角的大小与样品的密度、厚度相关，由此可以形成明暗不同的影像，影像将在放大、聚焦后在成像器件（如荧光屏、胶片，以及感光耦合组件）上显示出来进行观察。 返回目录 透射电镜光路 1．透射电子显微镜 返回目录 透射电镜结构示意图 1．透射电子显微镜 返回目录 透射电镜实物图 1．透射电子显微镜 返回目录 1．透射电子显微镜 透射电镜图片 巨大血小板 淋巴细胞 返回目录 2．扫描电子显微镜 成像原理： 是用一束极细的电子束扫描样品，在样品表面激发出次级电子（主要是二次电子），次级电子的多少与样品的表面结构有关，次级电子由探测器收集并转变为光信号，再经光电倍增管和放大器放大，转变为电信号经数据处理后在显示器上显示出与电子束同步的扫描图像。 返回目录 扫描电镜成像原理 2．扫描电子显微镜 返回目录 扫描电镜实物图 2．扫描电子显微镜 返回目录 扫描电镜图片 血液中的有形成份 单核细胞（P-伪足） 2．扫描电子显微镜 返回目录 3．光学显微镜和电子显微镜性能比较 项目名称 光学显微镜 透射电镜 扫描电镜 分辨力 100～200nm 0.1～2nm（晶格）、0.3nm（点） 3～10nm 放大