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电化学发光免疫法定量测定乙肝表面抗原性能评价 　　摘要：目的 对电化学发光免疫法定量测定乙肝表面抗原的性能进行分析评价 方法 使用质控品和定值参考血清对美国雅培公司Architect i2000免疫发光系统的灵敏度、重复性和线性范围进行分析。收集155例乙型肝炎患者的血清运用本法和ELISA法分别测定，比较两者结果。结果 Architect i2000系统对HBsAg的检测灵敏度可达到0.2μg/L，测定血清HBsAg在0～250 U/mL范围内线性可靠。质控品阳性样品1、2的变异系数分别为5.23%、5.45%；ELISA法的检测结果灰区范围是1.01～2.00U/ml。结论 雅培Architect i2000免疫发光系统定量检测乙肝表面抗原灵敏度高，重复性好，检测范围宽，具有很好的临床应用价值。 　　关键词：电化学发光免疫法；乙肝表面抗原；定量测定 　　血液乙肝表面抗原（HBsAg）的浓度能够很好的反映慢性乙肝患者体内肝细胞病毒的复制水平，乙肝表面抗原（HBsAg）水平定量分析正在逐渐成为临床上监测慢性乙型肝炎治疗效果的重要指标之一。电化学发光免疫测定（Chemiluminescence Immunoassay，ECLI ）是将电化学发光反应和免疫测定相结合而产生的一种免疫分析方法。电化学发光免疫技术在临床上已初步应用于测定乙肝标志物。本研究旨在探讨雅培Architect i2000免疫发光系统定量测定乙肝表面抗原的性能。现报道如下。 　　1 资料与方法 　　1.1 标本来源 　　收集2013年9月至2014年3月期间我院门诊及住院乙型肝炎患者155例，其中有男患者86例，女患者69例，年龄18～72岁。在患者空腹时取静脉血3毫升，在促凝管中自然凝固后采用离心法制得血清，厦门英科新创提供的乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（ELISA 法）测定HBsAg结果为阳性，阳性血清标本在-20℃冰箱内低温保存。所有患者均符合我国病毒性肝炎防治方案的相关诊断标准。 　　1.2 仪器与试剂 　　美国雅培公司Architect i2000免疫发光系统以及HBsAg定量试剂和校准品；厦门英科新创提供的乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒，Rayto的酶标仪和汇松的洗板机。由广东省临床检验中心提供的HBsAg浓度为1.0μg/L定值参考血清。 　　1.3 研究方法 　　1.3.1 阳性判断 　　Architect i2000系统检测结果为大于或等于0.05U/mL时判断为HBsAg阳性；确证试验：同时分别测定在同一样品中加与未加中和抗体所得的定量值，将两者的差所占未加中和抗体定量值的百分率定义为中和率，当中和率大于50%时确认患者为HBsAg阳性。 　　1.3.2 灵敏度试验 　　将1.0μg/L定值参考血清分别作1倍、2倍、5倍和10倍稀释，使用Architect iR2000系统分别测定HBsAg的浓度，对所有HBsAg浓度大于0.05U/mL的结果进行中和确证试验。 　　1.3.3 重复性试验 　　每天采用Architect iR2000系统对购自雅培公司的HBsAg质控样品阳性样品1和阳性样品2进行检测，连续进行20天。其中阳性样品1的浓度为0.25U/mL，阳性样品2的浓度为175.00U/mL。计算出平均值、标准差和变异系数。 　　1.3.4 线性试验 　　系列稀释购自雅培公司的配套HBsAg校准品配制成标准品，使用Architect iR2000系统分别测定出系列标准品的定量值，比较理论值与测定值的相关性。 　　1.3.5 Architect i2000系统和ELISA 法HBsAg测定结果比较 　　分别采用Architect i2000系统和ELISA 法对155例患者的备检血清进行HBsAg检测，比较两者检测结果。 　　2 结果 　　2.1 灵敏度评价 　　由表1可见，Architect i2000系统对HBsAg的检测灵敏度可达到0.2μg/L。 　　2.2 重复性试验 　　由表2可见，质控品阳性样品1的测定值为（0.23±0.013）U/mL，变异系数为5.23%，阳性样品2的测定值为（177±11）U/mL，变异系数为5.45%。 　　2.3线性试验结果 　　由表3可见，系数倍数和测定值之间有良好的相关性，相关系数为0.9876。HBsAg含量为0～250U/mL时，Architect i2000系统测定血清HBsAg的结果线性可靠。 　　2.4 Architect i2000系统与ELISA法测定HBsAg结果比较 　　ELISA法在Architect i2000系统测定结果小于1.00U/mL的39例样本中只检测出了3例阳性，在大于2.01的107例样本只检测出2例阴性，提示ELISA法的检测结果灰区范围是1.01～2.