草莓连坐土壤脲酶活性结题报告.docxVIP

《草莓连作过程中土壤脲酶活性的检测》大学生创新训练计划项目结题报告项目组成员：黄涛 邵健敏 李佳杨指导老师：刘小林教授学院:生命科学与资源环境学院摘要：土壤脲酶是土壤中一种重要的酶，其作用是催化土壤中的尿素水解，其活性变化与土壤中的氮素含量与理化性质有关。因此测定草莓连作各个时期脲酶的活性变化对研究草莓连作土壤脲酶活性的影响有重要理论意义和实践意义。本实验是采用靛酚蓝比色法测定土壤中的脲酶活性，目前，对土壤中的脲酶研究较多，但对作物连作中土壤脲酶活性变化的研究较少，尤其对草莓连作过程中脲酶变化及其对草莓连作自毒障碍影响的研究则更少。关键词：土壤脲酶、靛酚蓝比色法、草莓连作、酶活性。一、实验研究内容1.标准曲线的测定吸取10ml氮的标准溶液定容至100ml，摇匀。从其中分别吸取0，1.00，3.00，5.00，7.00，10.00ml 13.00ml移至50ml比色管中，加水至20ml，再加入4ml苯酚钠的溶液，充分混合。紧接着加入3ml次氯酸钠，随加随摇匀，放置20分钟,用水稀释至刻度。将显色液在可见分光光度计上于578nm处，以1cm比色皿进行比色测定，以试剂空白为参比。以标准溶液氮含量为横坐标，以吸光度值为纵坐标绘制标准曲线：图1 氮的标准曲线2.土样中脲酶活性的测定 分别称取2g过1mm筛的风干土样于50ml锥形瓶中，向其中加入1ml甲苯，以使土样全部湿润为宜。放置15分钟后，加入10ml 10％尿素溶液和20ml柠檬酸缓冲液（pH=6.7），并摇匀。将锥形瓶放入37℃恒温箱中，培养24h。培养结束后，加热至38℃水稀释至刻度，充分摇荡，并将悬液用滤纸过滤到锥形瓶中。 设置有土无基质对照，即考察各种溶液和土壤中氨氮存在带来的影响。分别吸取（1-3ml）滤液于50ml容量瓶中，加蒸馏水至20ml，充分震荡，然后加入4ml苯酚钠，充分混合，再加入3ml次氯酸钠充分摇荡，放置20分钟，用水稀释至刻度，溶液呈现靛酚的蓝色（在1h内保持稳定）。在分光光度计上用1cm比色杯，于578nm处进行比色测定。测得第一组土壤样品原始数据（用A1表示）见表1，（表1中：处理1表示万载开花期连作一年土壤样品、处理2表示万载现蕾期连作一年土壤样品、处理3表示万载定植期连作一年土壤样品、处理4表示万载现蕾期连作两年土壤样品、处理5表示万载定植期连作两年土壤样品、处理6表示学校旁盛果期连作两年土壤样品、处理7表示学校旁定植期连作三年土壤样品、处理8表示万载没种草莓土壤样品、处理9表示学校旁没种草莓土壤样品）。表1 第一组土壤样品处理数据测得第二组土壤样品原始数据（用A2表示）见表2（表2中：处理1表示万载开花期连作一年土壤样品、处理2表示万载现蕾期连作一年土壤样品、处理3表示万载定植期连作一年土壤样品、处理4表示万载现蕾期连作两年土壤样品、处理5表示万载定植期连作两年土壤样品、处理6表示学校旁盛果期连作两年土壤样品、处理7表示学校旁定植期连作三年土壤样品、处理8表示万载没种草莓土壤样品、处理9表示学校旁没种草莓土壤样品）。表2 第二组土壤样品处理数据3.无土对照：不加土样，其它实验过程和测定方法同上。测得吸光度为：A0=0.079。4.无基质对照：以相同体积水代替基质，其他与实验相同，用A2表示。测得样品数据见表3（表3中：处理1表示万载开花期连作一年土壤样品、处理2表示万载现蕾期连作一年土壤样品、处理3表示万载定植期连作一年土壤样品、处理4表示万载现蕾期连作两年土壤样品、处理5表示万载定植期连作两年土壤样品、处理6表示学校旁盛果期连作两年土壤样品、处理7表示学校旁定植期连作三年土壤样品、处理8表示万载没种草莓土壤样品、处理9表示学校旁没种草莓土壤样品）。表3 土壤无基质对照土壤样品处理数据二、实验结果1．数据处理：将测得的第一组土壤样品的原始数据A1与第二组土壤样品原始数据A2，并取其平均值。后用所得的平均值减去空白对照的吸光度A0，以排除药品溶液对实验的影响，然后将所得数据减去对应无基质对照土壤样品数据A2 ，得到实验的有效数据A。根据标准曲线的测定结果，以有效数据A表示土壤中脲酶活性的大小。公式如下：A=(A1+A2)/2-A1-A2土壤样品吸光度的有效数据A见表4（表4中：处理1表示万载开花期连作一年土壤样品、处理2表示万载现蕾期连作一年土壤样品、处理3表示万载定植期连作一年土壤样品、处理4表示万载现蕾期连作两年土壤样品、处理5表示万载定植期连作两年土壤样品、处理6表示学校旁盛果期连作两年土壤样品、处理7表示学校旁定植期连作三年土壤样品、处理8表示万载没种草莓土壤样品、处理9表示学校旁没种草莓土壤样品）。 表4土壤样品吸光度有效数据土壤脲酶的活性柱形图见图2。图2 土壤脲酶活性柱形图2．实验结果分析：由上述图表数据可以看出，不同地方土壤样品