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Fas670 gene基因多态性与胃癌相关性研究 　　【摘要】目的:研究Fas-670基因多态性在武汉地区胃癌患者及良性胃十二指肠疾病患者中的分布情况,探讨Fas-670基因多态性与胃癌的关系。方法:收集武汉地区275例胃十二指肠疾病患者和169例健康志愿者者的外周血标本,提取DNA , 用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性法（PCR-RFLP） 检测FAS-670基因多态性分布,并比较这些基因多态性在各组的分布差异。结果:Fas-670的基因型Fas G / G基因型的比率明显高于健康对照组（34%比25%），而Fas-670的A / A型明显低于健康对照组（13%对32%，χ216.527，P0.0003 ） 。Fas-670 G等位基因的比例与胃癌显著性相关（χ211.871， P值0.0006，95% CI为： 1.281-2.394） ，而A等位基因未见与胃癌有相关性（χ218.886，P0.0001，95%，CI为：0.354-0.671）结论:FAS-670的626G/C基因型可能与武汉地区胃癌发生的风险有关。 　　【关键词】肿瘤坏死因子;相关凋亡配体（FAS-670）; 基因多态性;胃癌 　　【中图分类号】R735.2【文献标识码】A【文章编号】1008-6455（2011）04-0134-02 　　细胞凋亡是一种基本的生物现象，并参与了各种生理功能，如在机体发育过程中或在某些病理过程，包括免疫系统疾病和肿瘤的发展，调节细胞数量和消除的有害或有潜在危险的细胞。FasL 系统在许多类型的细胞凋亡信号传导过程中扮演了重要角色。 Fas抗原是一个45 kDa的细胞表面蛋白，属于死亡受体家族的肿瘤坏死因子/神经生长因子受体超家族。结合的Fas配体（ FasL ）的Fas抗原启动死亡信号级联反应，从而导致细胞凋亡。 Fas受体广泛表达在各种组织细胞上，但FasL表达仅限于细胞内的免疫系统，如激活T细胞和自然杀伤细胞，或免疫特异细胞，如眼睛和繁殖器官[1]。许多肿瘤细胞都已经被证明有Fas和FasL表达的改变。迄今为止，一些研究表明在许多人类恶性实体肿瘤，包括食管癌[2]和乳腺癌中，Fas出现下调。班尼特等人曾[3]报道了胃癌中存在FasL上调和肿瘤浸润淋巴细胞（淋巴细胞）凋亡。其他的一些研究也表明在人胃癌细胞腺瘤和癌能检测到许多凋亡细胞，及出现胃癌组织FasL上调，从而逃避宿主免疫攻击[4]。Fas基因已被确定位于染色体10q24.1区域，而FasL基因位于染色体1q23，两个潜在功能多态性（即白细胞介素-1B-511T和IL-1RN第2/2）被认为与幽门螺旋杆菌感染与IL-1β的表达有关，由此可能增加了发生各肿瘤的风险。但研究胃癌患者和其Fas FasL基因多态性的之间关系还未见报道。 　　1 材料与方法 　　1.1 研究对象 　　（1）胃癌组 171例胃癌患者来自2001年12月～2005年12月武汉大学中南医院门诊和住院患者，所有病例均经我院组织病理学证实为胃腺癌，采样前未进行过化疗或放疗。其中男72例，女63例；平均年龄61.00±1. 64岁（24～84岁）。 　　（2）正常对照组 收集同期武汉大学中南医院健康体检者152例，其中男92例，女60例；平均年龄50.03±1.47岁（21～77岁），均为无血缘关系的湖北汉族人，既往无消化道症状、无糖尿病、系统性红斑狼疮、关节炎及炎症性肠病等病史。 　　1.2 方法 　　（1）DNA提取：取3ml抗凝血，用蛋白酶K（Merck公司）消化，酚/氯仿法提取基因组DNA。 　　（2）Fas-670基因PCR扩增：Fas-670基因片段PCR引物根据文献设计，由北京三博远志生物工程技术有限公司合成，顺式5’-CTACCTAAGAGCTATCTACCGTTC-3’；反式5’-GGCTGTCCATGTTGTGGCTGC-3’。PCR反应体系总体积25l，含灭菌双蒸水18.51，10×PCR反应缓冲液2.5l，每侧引物各10pmol， dNTPs（Clontech公司）10mmol/L 0.5l，TaqDNA聚合酶（Biostar公司）2U，DNA模板11（约40～100ng）。反应条件：94℃预变性4分钟，接着30个循环，94℃变性30秒，56℃复性30秒，72℃延伸30秒，72℃终末循环5分钟，最后置于4℃终止反应。 　　（3）限制性内切酶消化PCR扩增产物：取10l PCR产物，用限制性内切酶Mva I（MBI公司）0.5l（10U/l）于37℃消化酶切过夜，于65°C灭活20分钟。 　　（4）PCR产物鉴定：对消化后的PCR产物片段采用2%琼脂糖凝胶电泳电泳（100V，1.5小时）分离，溴化乙锭染色分析基因型。 　　233+99G 　　A（233+99bp） 　　G（1