第六章 基因的表达（上）.pptxVIP

DNA－RNA－Protein 的序列之间的对应第七章 转录和转录后加工——RNA合成和加工 转录是以DNA为模板，在依赖于DNA的RNA聚合酶的催化下合成RNA的过程,包括RNA链的起始、延伸、终止等步骤。由RNA聚合酶催化的反应 RNA聚合酶NTP+(NMP)n (NMP)n+1+PPi RNA聚合酶的反应条件需双链DNA模板;转录时，按5’ 3’方向合成RNA链；以4种NTP（A，U，G，C）为底物；不需引物，能够起始新链的合成，而且保留5‘端3磷酸。 1.1 DNA 是RNA合成的模板： 模板链（反义链,非编码链, non-Coding Strand ）: DNA两条链中有一条链作为模板转录为RNA，不同基因使用不同链作模板。 非模板链 (有义链，编码链, Coding Strand)：与转录出来RNA顺序一致，但U代替了T。模板链与非模板链RNA的种类：mRNA, tRNA，rRNA基本是线性单链RNA分子，极少有环状RNA分子，但是含有部分双链区。 1.1 原核生物中的RNA聚合酶原核生物中由一种RNA聚合酶催化所有RNA (mRNA, rRNA和 tRNA)的合成。 核心酶： 2 ?，β；β’；ω亚基 RNA聚合酶全酶 σ亚基：启动子的识别RNA聚合酶是目前已知的最大的酶之一。E.coli RNA聚合酶亚基的功能与调控序列结合形成磷酸二酯键与DNA模板结合识别启动子和起始合成 核心酶与DNA序列结合是随机的，平均结合常数是2×1011； σ亚基提高全酶与特异序列（启动子）的结合能力，降低与随机序列结合的能力。例如：全酶与随机序列平均结合常数是108-109，而与启动子结合常数是1012-1014 。平均提高了约106倍。（T7噬菌体） 原核生物中的RNA聚合酶没有校对功能 可以吗？ 可以解释什么现象？转录起始?起始位点：RNA聚合酶识别的转录起始点，记做+1 ：上游区+1 下游区Upstream Downstream RNA聚合酶起始转录 位点 转录开始的部位记做+1，称为转录起始点，与复制起始点（ori）不同，ori为一个区域，转录起始点为一个碱基，与转录相同的方向为下游，标记为+1，+2，+3……，与转录相反的方向为上游，标记为-1，-2，-3…，注意没有0。启动子：是RNA聚合酶起始RNA合成所特异结合的DNA序列，是一段位于结构基因的上游区的DNA序列，能够活化RNA聚合酶，使之与模板DNA准确地相结合，并具有转录起始的特异性。大肠杆菌启动子：启动子上有两段保守顺序或称一致顺序（consensus sequence）： -10 区（Pribnow box）5′TATAAT 3 ′-35 区 （Sextama box） 5 ′TTGACA 3 ′16--19 bp最佳距离 5--9 bp最佳距离启动子结构原核生物的启动子中的两个保守序列， 5 ′TTGACA 3 ′ 5 ′ TATAAT 3 ′ 82 84 78 65 54 45 80 95 45 60 50 96＋1（各碱基在该处出现的频率） 转录区 -35区-10区 Sextama box Pribnow box RNA聚合酶并不识别碱基本身，而是通过氢键互补来识别。 所以，特异序列有一定的可变性。同时表明启动子功能即受DNA序列影响，又受其构象影响。大肠杆菌中部分启动子上的一致顺序 σ亚基的作用是负责模板链的选择和转录的起始，它是酶的别构效应物，使酶专一性识别模板上的启动子。 不同的σ亚基可以辨别不同的启动子，通过不同σ亚基调控不同基因转录起始，以适应环境变化及生物生长发育不同阶段的需求。如σ32亚基专一于热激蛋白（Heat shock protein）基因的启动子。由含?70RNA多聚酶全酶识别的典型大肠杆菌启动子原核生物RNA合成的三个阶段 ：起始 延伸 终止（一）起始：RNA合成在启动子上起始包括：封闭复合物，开放复合物和三元复合物的形成。RNA聚合酶含盖在起始点的上游70bp处，这种结构由DNA、RNA聚合酶构成，叫做二元闭合复合体。当DNA双链变成单链时，称为二元开放复合体，这个阶段是不可逆的。解旋区域：－9---＋13。这时，RNA的合成即开始，当第一个酯键形成后即形成三元复合物，标志着起始基本成功。 RNA链上第一个核苷酸是嘌呤核苷酸pppA 或pppG。图转录起始并不是指第一个碱基加上，而是在RNA合成达到6-9个碱基的时候，此时?因子释放，标志着转录起始终止。问题： ?因子为什么要释放随机性和特异性的有机结合 ?亚基释放增加RNA聚合酶与随机序列的结合强度，同时，