酶的故事.pptVIP

国际酶活力单位 1961年,国际生物化学协会酶学委员会提出采用统一的“国际单位”(IU)来表示酶活力，规定为：在最适反应条件(温度25℃)下，每分钟内催化1微摩尔(umo1)底物转化为产物所需的酶量,定为一个酶活力单位，即 1 IU = 1 umol／min。 国际酶活力单位 1972年国际酶学委员会又推荐一种新的酶活力国际单位，即Katal(简称Kat)单位。 规定为：在最适条件下，每秒钟能催化1摩尔(mo1)底物转化为产物所需的酶量，定为1Kat单位(1Kat=1mol·s—1)。Kat单位与IU单位之间的换算关系如下： 1 Kat = 60×106 IU 1IU = 1／60 μKat = 16．7nKat 6.1.3 酶的比活力(specific activity) 比活力:每mg蛋白质所含的酶活力单位数表示， 比活力=活力U／mg蛋白=总活力U/总蛋白mg 有时用每g酶制剂或每m1酶制剂含有多少个活力单位来表示(U／g或U／ml)。 比活力大小的含义：可用来比较每单位质量蛋白质的催化能力。比活力愈大，表示酶的纯度愈高。 6.2 酶的分离和纯化的标准 为了判断分离提纯方法的优劣，一般用两个指标来衡量， 一是总活力的回收；(表示提纯过程中酶的损失情况) ;总活力=活力单位数／ml酶液×总体积(m1) 二是比活力提高的倍数(表示提纯方法的有效程度) 。比活力=活力单位数／mg蛋白(氮)=总活力单位数／总蛋白(氮)mg 一个理想的分离提纯方法希望比活力和总活力的回收率越高越好， 6.2.1 酶分离和纯化的步骤 (1)选材 选择酶含量丰富的新鲜生物材料， 酶的提取工作应在获得材料后立即开始，否则应在低温下保存，—20～—70℃为宜。或将生物组织做成丙酮粉保存。 (2)破碎 动物组织细胞较易破碎，通过一般的研磨器、匀浆器、高速组织捣碎机就可达到目的。微生物及植物细胞壁较厚，需要用超声波、细菌磨、冻融、溶菌酶或用某些化学溶剂如甲苯、去氧胆酸钠、去垢剂等处理加以破碎，制成组织匀浆。 (3)抽提 在低温下，以水或低盐缓冲液，从组织匀浆中抽提酶，得到酶的粗提液。 (4)分离及纯化 酶是生物活性物质，操作条件要温和，一般在0～5℃间进行。 初分：用分离蛋白质的方法，如盐析、等电点沉淀、有机溶剂分级、选择性热变性等方法可从酶粗提液中初步分离酶。 细分：再采用吸附层析、离子交换层析、凝胶过滤、亲和层析、疏水层析及高效液相色谱法等层析技术或各种制备电泳技术进一步纯化酶，以得到纯的酶制品 (5)结晶 酶的结晶过程进行得很慢，需要数天或数星期。 (6)保存 通常将纯化后的酶溶液经透析除盐后冷冻干燥得到酶粉，低温下可较长时期保存。 也可将酶溶液制成25％甘油或50％甘油分别贮于—25℃或—50℃冰箱中保存。 注意：酶溶液浓度越低越易变性，因此切记不能保存酶的稀溶液。 6.2.2 酶分离和纯化的注意事项 1.在过滤或搅拌等操作过程中，要防止泡沫的生成，以避免酶蛋白在溶液的表面变性。 2.重金属离子对某些酶的破坏作用，在提取液中加入少量金属鏊合剂EDTA。 3.有些含巯基的酶在分离时，往往需要加入某种巯基试剂，如巯基乙醇、二硫苏糖醇(DTT)等，可防止酶的巯基在制备过程中被氧化。 4.为了防止内源蛋白酶对酶的水解，在提取液加入少量蛋白酶抑制剂。 7. 环保型棉织物退浆用胰酶的制备 胰酶，其主要成分为胰蛋白酶、胰脂肪酶和胰淀粉酶。目前在棉布纺织退浆过程中，使用BF-765淀粉酶胰酶退浆会使棉织物产生阴纹。纺织企业中所需的胰酶粉的主要成分与其它工业部门有所不同，其主要需要胰淀粉酶具有高活力，而对胰蛋白酶的活力要求不高。目前，国内外主要采用醇酮法提取胰酶，这种工艺对淀粉酶的活性损失较大，试剂易燃有毒，环境污染严重，生产成本较高。因此，对目前国内流行的胰酶工艺进行改进，使其既注重环保,又符合纺织企业生产的工艺要求。这对扩大胰酶的应用，提高猪胰脏的资源利用率，减少环境污染都有重要意义。 工艺流程 Tab 1.The difference of activity and yield of pancreatic in different activators 激活剂 淀粉酶活力/（u/g） 收率/% Ca2+ 63600 12.1 十二指肠＋胰酶粉 88500 12.4 Tab 2.The effect of difference precipitator to the activity of pancreatin 方法 淀粉酶活力/（u/g） 收率/% 乙醇沉淀法 80231 11 丙酮沉淀法 78742 10.2 壳聚糖沉淀法 825