柑橘溃疡病菌中用GFP标记蛋白质亚细胞定位以分裂隔膜为目标.docVIP

1 -柑橘溃疡病菌中以分裂隔膜为目标作为GFP标记的蛋白质的亚细胞定位读书报告 专业 ：应用微生物 学号 :112011325001861 姓名 :左佩佩目录TOC \o 1-3 \h \u HYPERLINK \l _Toc25563 摘要 PAGEREF _Toc25563 - 2 - HYPERLINK \l _Toc26413 引言 PAGEREF _Toc26413 - 2 - HYPERLINK \l _Toc31878 材料和方法 PAGEREF _Toc31878 - 4 - HYPERLINK \l _Toc7106 细菌菌株和培养基 PAGEREF _Toc7106 - 4 - HYPERLINK \l _Toc10407 一般方法 PAGEREF _Toc10407 - 4 - HYPERLINK \l _Toc26841 病原性实验 PAGEREF _Toc26841 - 6 - HYPERLINK \l _Toc16269 荧光显微法 PAGEREF _Toc16269 - 7 - HYPERLINK \l _Toc20933 结果 PAGEREF _Toc20933 - 7 - HYPERLINK \l _Toc912 Xac中蛋白质表达载体的构建 PAGEREF _Toc912 - 7 - HYPERLINK \l _Toc29317 表达系统显示稳定的整合到Xac染色体上 PAGEREF _Toc29317 - 8 - HYPERLINK \l _Toc8088 破坏amy基因座不改变Xac的毒力 PAGEREF _Toc8088 - 9 - HYPERLINK \l _Toc21949 Xac中蛋白质的亚细胞定位 PAGEREF _Toc21949 - 12 - HYPERLINK \l _Toc14759 讨论 PAGEREF _Toc14759 - 16 -柑橘溃疡病菌中以分裂隔膜为目标作为GFP标记的蛋白质的亚细胞定位摘要柑橘溃疡病菌（Xac）是产生柑橘癌症的原因，是影响全世界柑橘的一种重要的疾病。为了了解Xac的重要生物学过程的特点，我们构建了在这种细菌中用绿色荧光蛋白（GFP）标记的蛋白质异位表达的整合质粒。我们指出α-淀粉酶基因（amy）的破坏-质粒整合到细菌染色体上的位点，没有改变细菌的病原性，然而完全破坏了Xac降解淀粉的能力。进一步说，GFP表达系统被用来描述ORF XAC3408的特点，通过Xac编码的假设蛋白质，这个蛋白质与枯草芽孢杆菌中的FtsZ稳定因子ZapA具有明显的同源现象（ZapABsu）。Xac中表达的GFP- XAC3408显示了GFP-ZapABsu一个典型的隔膜定位类型，这个表明XAC3408是细胞分裂蛋白ZapABsu的Xac直系同源基因。这个结果显示Xac中用GFP标记具有功能特点蛋白质的潜力，另外，在隔膜处标记的Xac突变株构成一个生物模型，为了检测抗菌化合物抑制植物病原体细胞分裂。关键词 ：柑橘癌症；细胞分裂；α-淀粉酶引言柑橘溃疡病菌是革兰氏阴性菌，是影响大部分柑橘属的植物病原菌，并且是成为植物癌症的原因，对全世界来说是柑橘属植物的一种非常重要的疾病。不存在有效控制这种病的方法，更加详细了解生物病原性机理可能在实质上形成预防和控制感染的方法。完成这个任务的主要工作是阐明Xac的基因组序列，基因组序列已经促进利用Xac作为模式微生物进行大量的分子研究，然而，没有合适的技术方法可以促进蛋白质组检测。我们主要集中研究Xac的某些重要生物学过程的特点，在染色体分离和细胞分裂中包括的更加特殊的生物学过程。这个细菌系统的一个共同的特点是这个细菌系统经常有蛋白质构成的，这些蛋白质与在许多衍生的真核生物中与他们功能相似的蛋白质具有很少的同源性；因此，这些蛋白质构成抗菌药物形成和病原控制构成完美的目标。然而，为了在Xac中着手进行蛋白质功能研究，我们为这个目的缺少发展的和/或者可利用的生物学功能。我们描述了Xac中一个蛋白质表达系统，这个也能够被用于这个病原体中用绿色荧光蛋白（GFP）标记因子的亚细胞定位。我们利用这个系统来描述Xac中假设蛋白质的特点，这个蛋白质与FtsZ稳定因子ZapA具有明显的同源性，FtsZ稳定因子ZapA最初在枯草芽孢杆菌中被描述（ZapABsu）。此外，我们指出α-淀粉酶基因的破坏，质粒整合到染色体上的位点，没有改变细菌的发病机理。材料和方法细菌菌株和培养基利用的是以被测序的柑橘溃疡病菌菌株，以前特指的柑橘溃疡病菌菌株306（IBSBF 1594）。大肠杆菌菌株DH10B被用于克隆。大肠杆菌利用LB/LB琼脂培养基在37℃条件下培养；Xac利用营养琼脂酵母甘油（NYG）/NYG琼脂培养