血清蛋白醋酸纤薄膜电泳.docVIP

实验一 血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳一、目的学习醋酸纤维薄膜电泳的操作，了解电泳技术的一般原理。二、原理带电颗粒在电场的作用下，向着与其电性相反的电极移动，称为电泳：采用醋酸纤维薄膜为支持物的电泳方法，叫做醋酸纤维薄膜电泳法。醋酸纤维薄膜由二乙酸纤维素制成，它具有均一的泡沫样的结构，厚度仅12μm，有强渗透性，对分子移动无阻力，作为区带电泳的支持物进行蛋白电泳有简便、快速、样品用量少，应用范围广，分离清晰，没有吸附现象等优点。目前已广泛用于血清蛋由、脂蛋白、血红蛋白、糖蛋白和同功酶的分离及用在免疫电泳中。三、器材1．醋酸纤维薄膜（2×8cm）2．常压电泳仪3．点样器4．培养皿5．粗滤纸6．玻璃板7．竹镊8．白磁反应板9．新鲜血清四、试剂1．巴比妥缓冲液（pH8.6，离子强度0.07）巴比妥2.67g，巴比妥钠15.45g，加水至1000m1。2．染色液含氨基黑10B 0.25g，甲醇50ml，冰醋酸10ml，水40m1。 可反复使用。3．漂洗液含甲醇或乙醇45 m1，冰醋酸5ml，水50m1。4．透明液含无水乙醇7份，冰醋酸3份。五、操作1．浸泡：用镊子取醋酸纤维薄膜一张（识别光泽面与元光溶面，并在一角做上记号），放在缓冲液中浸泡20min。2．点样：把膜条从缓冲液中取出，夹在两层粗滤纸内吸干多余的液体，然后将无光泽重面朝上平铺在玻璃扳上。将点样器放置于白磁反应板中的血清中沾