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非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳银染实验操作指导书(银染) V1.0
品保部实验操作指导书 编 号 版 本 页 码 3 制 定 审 核 批 准 主题 分析室样品检测指导书 编号 DNA非变性聚丙烯酰胺凝胶
1． 目的：规范银染检测非变性聚丙烯酰胺凝胶中的蛋白质或DNA的测定方法与操作，特制定本规程。
2．范围：本规程适用于已知蛋白表达的测定。
3．责任：实验室检验人员对实施本规程负责。
4．实验原理： 在碱性条件下，用甲醛将蛋白带上的硝酸银（银离子）还原成金属银，以使银颗粒沉积在蛋白带上。染色的程度与蛋白中的一些特殊的基团有关，不含或者很少含半胱氨酸残基的蛋白质有时候呈负染。
5．仪器与器具
移液枪和枪头、脱色摇床、EP管、 205ml锥形瓶、塑料盒、电泳仪、垂直电泳槽及其附件、玻璃板
6．电泳试剂
6.1．30%丙烯酰胺溶液：
丙烯酰胺：29g,N,N’-亚甲基双丙烯酰胺：1g,加去离子水定容至100ml，装于棕色瓶内，4℃可保存两个月。
6.2．过硫酸铵0.1g/ml：称取过硫酸铵1g加去离子水值10ml。4℃可保存一周，-20℃可保存一个月。
6.3．TEMED(四甲基乙烯基二胺)：和 过硫酸铵一起作为交联反应的催化剂。易吸潮，4℃封闭保存。
6.4. 5*TBE电泳缓冲液
分别称取54克Tris,27.5克硼酸，20ml0.5M/EDTA(pH=8.0)定容至1L
6.5.上样Loading Buffer
分别准确称量溴酚蓝和二甲苯青各0.1克，转入50ml容量瓶中（黏附在称量纸上的少量粉末可用移液器西区甲酰胺钟乳容量瓶中），再介入1mlEDTA，最后用甲酰胺定容至50ml。
7.银染试剂
7.1固定液：100ml无水乙醇，5ml冰醋酸，定容至1L。
7.2 0.4%硝酸银：硝酸银1克，水250ml。
7.3 1.5%氢氧化钠：氢氧化钠15克，水1L。
7.4 37%甲醛
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