动物繁殖学ppt课件4转基因与克隆.ppt

转基因动物的研究; 转基因动物 Transgenic animal ;生命科学中一个多层次、多侧面、四维的研究体系。; 首例整合有不同外源基因的转基因动物 转基因兔 (Brem 1985) 转基因绵羊 (Hammer 1985) 转基因猪 (Hammer 1985) 转基因牛(Roschlau1989) 转基因山羊 (Ebert 1991) 转基因鱼 (朱作言1986) 转基因鸡 (Sang 1994);制备转基因动物的基本过程;出于安全性考虑，反转录病毒转染法主要是作为实验手段应用于转基因动物的研究。; 胚胎干细胞转移基因转移 法; 以精子作为基因的裁体制作转基因动物以其简单、高效、广泛适用的特点引起众多的科学家的广泛兴趣，大量实验证实，精子能够吸附外源DNA，而且大多数被吸附的外源DNA位于精子头部的赤道段和顶体后区，精子这种吸附DNA的能力不是简单的物理过程而是由精子头部蛋白所介导的。 极少数DNA能够穿入精子核区，这部分DNA在核区内有的被降解；有的以附加体形式存在于基因组之外，只有极少数能够整合到基因组上，而且这种整合不是随机发生的。 虽然精子吸附外源基因，通过体外受精或人工授精的途径制作转基因动物的阳性结果和阴性结果的报道时有发表，但是这些实验之间转基因效率差异极大，而且未能获得足够的数据对这一差异提供解释， 没有从理论上阐明精子携带外源基因入卵的机制，也没有建立一套可重复性的稳定的制作转基因动物技术路线。;应用显微注射法制备转基因动物的技术路线 ;; 外源基因显微注射法具有外源基因的长度不受限制，可直接转导不含载体的DNA片段，实验周期短，且较安全，是目前培育转基因动物最有效、成功率较高的技术途径； 影响因素：DNA浓度、缓冲液成份、基因构型、注射部位等 阳性率(以移植产下的原代活仔畜计)： 小鼠(17.3%)、家兔(12.8%)、大鼠(17.6%)、 牛(3.6%)、猪(9.2%)、绵羊(8.3%)。;人类疾病动物模型 ; 己培育了许多种(如白血病、高血压、肿瘤、老年病等)转基因小鼠，使人类对致病基因的发病机理、遗传规律及基因表达与结构、环境因素的关系有了一个深入的了解，从而能进行科学的诊治。; ; 前期转基因动物的研究，己证实??人类基因不仅能在动物体内获得表达和遗传、并能获得组织特异性（如乳腺、血液、膀胱）和发育特异性（如泌乳期）的表达。 其中以乳腺生物反应器的进展最引人注目。;Target protein expression vector; 目前，国际上己有多种转基因动物（绵羊、山羊、猪和牛）能生产上百种医用蛋白，其中有30余种进入Ⅱ、Ⅲ期临床，有的也己进行商业开发，产生了良好的经济效益，正逐步发展成一新兴产业。;;; 器官移植已成为治疗多种器官衰竭的有效手段，因人类同种移植器官的日益缺乏，人们希望能实现异种器官的移植。猪在解剖、生理等方面与人具有较大的相似性，且易繁殖饲养被选为人类移植用异种器官的主要供体动物。 ; 应用转基因技术，培育表达人补体调控蛋白，如人膜辅助因子蛋白（human membrane cofactor protein MCP）、人衰变加速因子（human decay-accelerating factor DAF）的转基因猪，有望抑制或减弱人补体对猪器官的攻击。;表达混乱：1.不在预期的组织内表达； 2.子代表达情况不同；3.同一启动子在不同个体或不同动物中表达行为不同；4.整合不表达。; 因外源基因的表达，受多种因素调节，如基因结构与整合位点，与转录有关的顺式结构和反式调节因子，外源基因在宿主体内的甲基化程度及环境因素等，这些众多的因素虽难以完全控制，但在外源基因构建时，应考虑与表达相关的调控元件。;;●转基因的“援救” 将不同基因或不同构建同时注射到同一受精卵中而建立的转基因动物。不同的基因构建以首尾相连的形式整合，在某种程度上形成一个相对独立的区域，或形成一个开放的染色体活性区域。如以生长激素基因与肠道脂肪酸结合蛋白基因共注射，转基因表达提高60%。;克隆动物概述;在实践上证明了利用体细胞进行动物克隆的技术的可行性。为大规模复制动物优良品种和生产转基因动物提供了有效方法。 ;主 要 内 容;一 克隆动物的生理基础 ;动物克隆的生理基础 ;二 体细胞克隆的方法; 目前，生产哺乳动物克隆的方法主要有胚胎分割和细胞核移植两种。 所谓细胞核移植，是指将不同发育时期的胚胎或成体动物的细