动物繁殖学第10讲卵子发生及其形态结构与体外保存ppt课件.pptVIP

第四章 雌性动物性机能发育与发情排卵及其调控 ;本讲内容;*;*; 雌性生殖细胞的分化、增殖、成熟全过程称为卵子发生（oogenesis） 卵子发生起始于胚胎早期,由原始卵原细胞经过有丝分裂、减数分裂最后成为单倍体的卵细胞过程，持续时间很长，一般在初情期以后开始，至受精过程中才能完成;卵子发生模式图;/c4b/11/hum11.4.htm#2;（一）卵子发生特点 ;卵原细胞分裂形成初级卵母细胞在胎儿出生前后不久完成 动物性成熟以前，卵母细胞不再增长 性成熟后，每个性周期有部分卵母细胞发育，多数卵母细胞在发育过程中退化，只有少数卵母细胞发育成熟排卵 ;卵母细胞在生长发育过程中要积累大量的营养物质和遗传信息，主要为胚胎发育提供营养和信息 哺乳动物的胚胎是在母体子宫内发育，直接吸收母体的营养物质，但一些母源性mRNA、tRNA、rRNA的合成还是必需的 鸟类、两??类、爬行类动物的卵需要存贮大量的卵黄物质;（二）卵子发生过程 ;卵母细胞经过最后一次有丝分裂后，即发育成为初级卵母细胞，形成原始卵泡 原始卵泡出现后有的卵母细胞便开始退化 初级卵母细胞特点： 卵黄颗粒增多，卵母细胞的体积增大 出现透明带 卵泡细胞通过有丝分裂而增殖 初级卵母细胞形成后,到初情期前,处于静止状态;2．卵母细胞的生长 ;在初级卵母细胞发育至第一次减数分裂前期的双线期便进入停滞状态，在许多动物该期细胞核明显、特别大，异染色质很少，看起来很像泡状，因此这一时期的卵母细胞称为生发泡（germinal vesicl，GV），此期核中含有大量的供早期胚胎发育所需的贮备物质 ;3．卵母细胞的成熟;初级卵母细胞发育至成熟分裂前期的双线期便进入停滞状态，当母畜发育到一定年龄，伴随着卵泡的增长，在生殖激素的支配和调节下，恢复成熟分裂过程。这时卵母细胞的核向卵质膜下移动，核仁和核膜消失，染色体聚集成致密状态，即生发泡破裂（germinal vesicl breakdown，GVBD）;初级卵母细胞发育至成熟分裂前期的双线期便进入停滞状态，当母畜发育到一定年龄，伴随着卵泡的增长，在生殖激素的支配和调节下，恢复成熟分裂过程。这时卵母细胞的核向卵质膜下移动，核仁和核膜消失，染色体聚集成致密状态，即生发泡破裂 GVBD是在显微镜下最早可以观察到的卵母细胞开始成熟信号 在光镜下先后表现为GVBD和第一极体（first polar body）排出 GVBD代表减数分裂的开始，而第一极体的排出标志着卵母细胞已达到核成熟;第一次成熟分裂，有一半染色质及少量细胞质排放到卵质膜与透明带之间的空隙（卵周隙）中，称为第一极体；另一个几乎得到全部细胞质，称为次级卵母细胞（secondary oocyte） 在第二次成熟分裂时，次级卵母细胞分裂为卵细胞和一个第二极体。第二次成熟分裂持续的时间相对短促，在许多动物都是在排卵之后的受精过程中完成的;营养来源不同 发生的连续性 形成的数量不同 排出时两者成熟度不同 最终两者形态不同 相对而言,卵母细胞在卵巢中的储备是有限的,而精子的产生是无限的;二、卵子形态结构 ;《动物繁殖学》，杨利国主编，中国农业出版社，2003年 ;（二）卵子的结构 ;1．放射冠;2．透明带;3．卵质膜;卵周隙 在卵质膜与透明带之间，由于卵母细胞的发育，特别是第一极体形成后卵黄的收缩会形成一定的空隙，即卵周隙（perivitelline space），具有保护卵子的作用，对精子有种属选择性 ;4．卵胞质;5．卵细胞核;未成熟卵母细胞;三、卵母细胞成熟机理 ;四、卵母细胞体外成熟 ;（一）卵母细胞的采集方法 ; ⑴ 卵泡抽吸法 操作：用针头穿刺卵泡而将卵母细胞抽吸出来。注射器应保持一定的负压，针头一般从卵泡的侧面刺入，一次进针可抽吸卵巢皮质的多个卵泡，不要只吸取一个卵泡就将针头拔出，否则容易导致污染 优点：回收速度快，不易造成卵母细胞的污染 缺点：容易损伤卵母细胞周围的卵丘细胞，影响其随后的成熟;⑵ 卵巢解剖法 操作：用手术刀片将卵巢切为两半，去掉中间的髓质部分，露出卵泡，然后用刀片划破卵泡，在培养液中反复冲洗，采集其中的卵母细胞 优点：能保持卵母细胞周围卵泡细胞的完整性，回收率也相对较高 缺点：回收的速度相对较慢，容易造成污染;2. 卵母细胞的活体采集 ; ⑵ B型超声波法 保定母畜，从尾荐结合处注入2ml左右的盐酸普鲁卡因作硬膜外腔麻醉 将带有超声波探头和采卵针的采卵器插入到阴道子宫颈的一侧穹隆处 术者通过直肠将卵巢贴在探头上，根据B超屏幕上所显示的卵泡位置进行穿刺而将卵母细胞抽出;⑵ B型超声波法;（二）卵母细胞IVM方法 ;卵母细胞的IVM培养尚需在上述基础液中加入一定浓度的血清（5~10%的FCS或ECS）和GTH （0.1~1.0?g/