毛蕊异黄酮葡糖苷对taa致brl-3a细胞氧化应激的保护作用研究-protective effect of calycosin glucoside on taa - induced oxidative stress in brl - 3a cells.docxVIP
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毛蕊异黄酮葡糖苷对taa致brl-3a细胞氧化应激的保护作用研究-protective effect of calycosin glucoside on taa - induced oxidative stress in brl - 3a cells
独创性声明本人声明,所呈交的学位(毕业)论文,是本人在指导教师的指导下独立完成的研究成果,并且是自己撰写的。尽我所知,除了文中作了标注和致谢中已作了答谢的地方外,论文中不包含其他人发表或撰写过的研究成果。与我一同对本研究做出贡献的同志,都在论文中作了明确的说明并表示了谢意,如被查有侵犯他人知识产权的行为,由本人承担应有的责任。学位(毕业)论文作者亲笔签名:日期:论文使用授权的说明本人完全了解福建农林大学有关保留、使用学位(毕业)论文的规定,即学校有权送交论文的复印件,允许论文被查阅和借阅;学校可以公布论文的全部或部分内容,可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。保密,在年后解密可适用本授权书。□不保密,本论文属于不保密。□学位(毕业)论文作者亲笔签名:日期:指导教师亲笔签名:日期:目录摘要1Abstract2第一章文献综述41肝脏氧化应激研究41.1氧化应激发生的机理41.2肝脏氧化应激的常见类型52黄芪黄酮类成分药理作用研究82.1黄芪黄酮类成分的主要种类82.2黄芪黄酮类成分保肝作用研究83BRL-3A细胞研究进展94CYP2E1酶和氧化应激114.1细胞色素P450酶系简介114.2CYP2E1酶与氧化应激的关系125本试验的研究目的及意义13第二章TAA致BRL-3A细胞氧化应激模型的建立和试验药物浓度的筛选151材料与方法151.1试验材料151.2试验方法151.3统计分析172结果与分析172.1TAA致BRL-3A细胞氧化应激模型药物浓度的选择172.2CG作用浓度的选择183讨论20第三章CG对氧化应激BRL-3A细胞转氨酶活性和抗氧化能力的影响211材料与方法211.1试验材料211.2试验方法211.3统计分析232结果与分析232.1CG对氧化应激BRL-3A细胞转氨酶活性的影响232.2CG对氧化应激BRL-3A细胞抗氧化能力的影响242.3CG对氧化应激BRL-3A细胞活性氧(ROS)的影响253讨论27第四章CG对氧化应激BRL-3A细胞中CYP2E1表达量的影响291材料与方法291.1试验材料291.2试验方法301.3统计分析372结果与分析37CG对TAA致BRL-3A细胞氧化应激模型microsome的影响37Real-TimePCR检测CG对氧化应激BRL-3A细胞CYP2E1mRNA的相对表达量39免疫印迹(Westernblot)检测CG对氧化应激BRL-3A细胞目的蛋白CYP2E1表达量的变化423讨论42第五章结论与创新点451结论452创新点45参考文献46附录一英文缩略词表(Abbreviation)52附录二主要试剂的配制53附录三试验主要仪器58致谢60摘要目的:探讨毛蕊异黄酮葡糖苷(Calycosin-7-O-β-D-glucopyranoside,CG)对硫代乙酰胺(TAA)致BRL-3A细胞氧化应激的保护作用。方法:以BRL-3A细胞为研究对象,通过TAA(0.18mol/L)损伤BRL-3A细胞2h建立氧化应激模型。用不同浓度的CG对细胞进行预处理(TAA损伤前12h加药),用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞存活率,试验设定空白对照组(N组)、氧化损伤组(TAA)组、低浓度(10mg/L)CG组(C1组)、中浓度(20mg/L)CG组(C2组)、高浓度(40mg/L)CG组(C3组)、联苯双酯(DDB)阳性对照组(PC组)。微板法检测细胞上清中丙氨酸氨基转移酶(ALT/GPT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST/GOT)活力;微板法、比色法检测细胞内总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)活力、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力、过氧化氢酶(CAT)活力及丙二醛(MDA)含量;荧光显微镜观察并使用荧光酶标仪和流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)含量的变化;紫外分光光度计法检测肝微粒体(microsome)中CYP450和细胞色素b5含量以及CYP2E1活性;Real-timePCR法检测细胞CYP2E1mRNA的相对表达量;WesternBlot法检测细胞CYP2E1蛋白表达情况。结果:当TAA浓度为0.18mol/L时,BRL-3A细胞存活率约为50%。TAA诱导的氧化应激导致BRL-3A细胞存活率、抗氧化能力的降低,转氨酶活性、细胞内ROS水平、CYP2E1mRNA的相对表达量和蛋白表达量升高。与TAA组相比,CG预处理组(10mg/L、20mg/L、40mg/L)不同程度地升高细胞存活率、抗氧化能力,降低转氨酶活性、细胞内ROS水平、CYP2E1mRNA的相对表达量和蛋白表达量。其中,以CG浓度为40mg/L时,保护效果最佳。结论:CG对TAA致BRL-3A细胞的氧化应激具有保护作用,使TAA致细胞氧化应激状态得到显著缓解。关键词:毛蕊异黄
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