慢性荨麻疹患者外周血t细胞亚群及cd4cd25cd127-调节性t细胞的表达-expression of t cell subsets and cd 4, cd 25, cd 127 - regulatory t cells in peripheral blood of patients with chronic urticaria.docxVIP

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2018-07-27 发布于上海
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慢性荨麻疹患者外周血t细胞亚群及cd4cd25cd127-调节性t细胞的表达-expression of t cell subsets and cd 4, cd 25, cd 127 - regulatory t cells in peripheral blood of patients with chronic urticaria.docx

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慢性荨麻疹患者外周血t细胞亚群及cd4cd25cd127-调节性t细胞的表达-expression of t cell subsets and cd 4, cd 25, cd 127 - regulatory t cells in peripheral blood of patients with chronic urticaria

试剂和仪器荧光试剂：4-FITC/8-PE/3-PC5组合抗体，BDPharmingen公司出品，批号：PNIM1650。辅助试剂：红细胞裂解液（FACSTMLysingSolution），BDBioscience公司出品,批号：Lot349202。磷酸盐缓冲液(PBS)，实验室自配，浓度0.01M，PH值7.2。实验器材：流式上样管（1cm*7.5cm）混匀振荡器（XW-80A型旋涡混合器）离心机，型号：5810R，Eppendorf公司出品。移液器，Tips流式细胞仪，型号：FACSCalibur，BDPharmingen公司出品。实验方法磷酸盐缓冲液(PBS)的制备称Na2HPO4?12H2O72克及NaH2PO4?2H2O28克，加纯水至1000ml,配成0.2M磷酸盐缓冲液(PB)。称NaCl8.9克，加纯水至950ml，再加入0.2MPB50ml，配成终体积为1000ml的PBS，浓度0.01M。采样分别对病例组和对照组采静脉血1ml置于EDTA抗凝管内，采血后4小时内进行实验。标本处理取流式上样管加4-FITC/8-PE/3-PC520μl，用移液器逐个吸取抗凝全血100μl至流式上样管。避光孵育15分钟，加1:10稀释的红细胞裂解液1ml，室温避光10分钟。1500转/分速度离心5分钟，弃上清，加磷酸盐缓冲液(PBS)2ml洗一次，弃上清，混匀，加PBS100?μl，混匀上流式细胞仪分析。标本检测标本上机后，利用Cellquest图像分析软件分析。先以前向散射光(FSC)和侧向散射光(SSC)参数观察细胞形态，找出淋巴细胞群，如图1a；然后在CD3和SSC双参数点图上选出CD3+细胞，如图1b（右下象限），由软件分析系统给出CD3+细胞占外周血有核细胞比例；在CD4和CD3双参数点图上选出CD3+CD4+细胞(即Th细胞)，如图1c(右上象限)，得出Th细胞占外周血有核细胞的比例；在CD8和CD3双参数点图上选出CD3+CD8+细胞(即Tc细胞)，如图1d（右上象限），得出Ts细胞占外周血有核细胞的比例。abcd图1慢性荨麻疹患者的Th/Tc细胞定量分析：CD3+细胞58.24%，CD3+CD4+T细胞(Th细胞)33.87%，CD3+CD8+T细胞（Tc细胞）22.03%。2.1.5统计学方法：应用统计软件SPSS13.0统计实验数据，实验数据用均数±—标准差（x±s）表示。两样本独立比较采用t检验，p﹤0.05为差异有统计学意义。结果Th/Tc细胞定量分析：病例组和对照组的CD3/CD4/CD8阳性细胞定量分析，见表3（表中数据均为三种细胞占外周血有核细胞的比例）。与对照组比较，CU患者外周血CD3+T细胞比例无明显变化（p0.05），CD3+CD4+T细胞(Th细胞)表达水平显著增加（p＜0.05），CD3+CD8+T细胞（Tc细胞）数量降低（p＜0.05），CD3+CD4+/CD3+CD8+比值Th/Tc明显升高（p＜0.01）。如表3所示。—表3病例组与对照组外周血T淋巴细胞亚群比较(%,x±s)组别例数CD3+(%)CD3+CD4+CD3+CD8+Th/Tc(%)(%)病例组4252.52±9.1426.78±6.5620.05±4.611.36±0.46对照组3553.36±7.5623.96±4.9722.77±4.391.06±0.11P值0.050.050.050.01小结：采用流式细胞术，以4-FITC/8-PE/3-PC5单克隆抗体测定正常人和慢性荨麻疹患者外周血CD3/CD4/CD8细胞：1.CU患者CD3+CD4+T细胞表达水平高于对照组（p＜0.05）。2.CU患者CD3+CD8+T细胞表达水平低于对照组（p＜0.05）。3.CU患者Th/Tc显著高于对照组（p＜0.01）。4.CU患者和健康人群CD3+T细胞比例无明显变化。讨论T细胞亚群对机体免疫功能的稳定起着重要的调节作用，T淋巴细胞表型的异常是反映自身免疫性疾病及变态反应性疾病病人免疫调节紊乱的重要指标。T细胞膜表面分子是T细胞识别抗原、与其它免疫细胞相互作用的物质基础，主要为白细胞分化抗原（CD）等各种膜表面受体。机体作为一个整体维持正常的免疫功能状态，有赖于各种免疫细胞之间的相互协作和制约，从而产生适度的免疫应答。CD3+细胞是总T淋巴细胞，它分为两个主要亚群：CD4+和CD8+细胞。CD4+T细胞进入外周免疫器官之后，被抗原肽与II类分子形成的复合物激活成为辅助型T细胞（Th），Th又可分为Th1、Th2、Treg和Th17。Th1介导细胞免疫，激活后的Th1细胞表面表达淋巴细胞激活基因－3(LAG-3)及其蛋白，分泌IFN-γ、IL-2、TNF-α、IL-12和GM-CSF，介导细胞免疫应答、迟发性超敏反应和器官特异