多聚酶链式反应扩增DNA片段 高二年级生物教学ppt课件.ppt

;;;;;;O;连 接 ;连 接 ;连 接 ;连 接 ;4、DNA分子的双螺旋结构;4、DNA分子的双螺旋结构;4、DNA分子的双螺旋结构;　　③两条链上的碱基通过氢键连接起来，形成碱基对。碱基对的组成有特定的规律：即腺嘌呤一定与胸腺嘧啶配对，鸟嘌呤一定同胞嘧啶配对。;（二）DNA的复制;2、时期;2、时期;2、时期;5、原料;5、原料;5、原料;5、原料;7、复制过程;7、复制过程;7、复制过程;DNA聚合酶的特性;DNA聚合酶的特性;?② RNA引物的合成;?② RNA引物的合成;?② RNA引物的合成;?② RNA引物的合成;DNA合成的方向;　　思考：DNA复制的前提是什么？ 体外扩增DNA 如何打开双链？ ;DNA复制的前提是______________； 用_________________方法;DNA复制的前提是______________； 用_________________方法;DNA复制的前提是______________； 用_________________方法;DNA 分子的热变性原理：;DNA双链;DNA双链;变性的目的：;变性的目的：;体外DNA复制的条件(PCR 反应的条件);①DNA模板； ②分别与两条模板链相结合的两种引物； ③四种脱氧核苷酸； ④耐高温的聚合酶； ⑤ 控制温度，但不需解旋酶。;（三） PCR的反应过程;1、PCR的反应步骤;①变性（模板DNA解旋）;靶序列;②复性（退火）;靶序列;③延伸;靶序列;靶序列;95℃变性;（1）PCR循环——变性;95℃变性;55℃复性;（3）PCR循环—延伸;（3）PCR循环—延伸;（3）PCR循环—延伸;（3）PCR循环—延伸;循环次数;循环次数;4、循环特点：;4、循环特点：;二、实验步骤;①准备好PCR反应体系的配方;①准备好PCR反应体系的配方;①准备好PCR反应体系的配方;①准备好PCR反应体系的配方;①准备好PCR反应体系的配方;①准备好PCR反应体系的配方;电泳检测PCR结果;;;　　3．在微量离心管中添加反应成分时，每吸取一种试剂后，移液器上的枪头都必须更换。所有的成分都加入后，盖严离心管口的盖子，用手指轻轻弹击管的侧壁，使反应液混合均匀，再将微量离心管放在离心机上，离心约10s，使反应液集中在离心管底部，再放入PCR仪中进行反应。;目的：;1、原理： ;1、原理： DNA在260nm的紫外线波段有一强烈的吸收峰。峰值的大小与DNA的含量有关。;四、结果分析与评价;3）加入步骤1中的DNA稀释液100 μL至比色杯中，测定260nm处的光吸收值。 4）根据下面的公式计算DNA含量。 ;3）加入步骤1中的DNA稀释液100 μL至比色杯中，测定260nm处的光吸收值。 4）根据下面的公式计算DNA含量。 DNA含量(μg/mL)=50 ×(260nm的读数)×稀释倍数;复习：PCR技术与体内DNA复制的区别;1. PCR不需要解旋酶；体内DNA复制需要；;1. PCR不需要解旋酶；体内DNA复制需要；;1. PCR不需要解旋酶；体内DNA复制需要；;1. DNA单链的________末端为3端，________末端为5端，在DNA复制时，引物从模板链的______端配对结合。在___________酶的作用下，引物提供____端，使子链向下延伸。 2. 每次循环可以分为_________________这三个过程，对应温度分别为_______________________。;1. DNA单链的________末端为3端，________末端为5端，在DNA复制时，引物从模板链的______端配对结合。在___________酶的作用下，引物提供____端，使子链向下延伸。 2. 每次循环可以分为_________________这三个过程，对应温度分别为_______________________。;1. DNA单链的________末端为3端，________末端为5端，在DNA复制时，引物从模板链的______端配对结合。在___________酶的作用下，引物提供____端，使子链向下延伸。 2. 每次循环可以分为_________________这三个过程，对应温度分别为_______________________。;1. DNA单链的________末端为3端，________末端为5端，在DNA复制时，引物从模板链的______端配对结合。在___________酶的作用下，引物提供____端，使子链向下延伸。 2. 每次循环可以分为_________________这三个过程，对应温度分别为_______________________。;1. DNA单