慢病毒介导sirnas沉默adamts-5基因治疗骨关节炎的实验分析-experimental analysis of chronic virus-mediated sirnas silencing adam ts - 5 gene in the treatment of osteoarthritis.docxVIP

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2018-07-27 发布于上海
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慢病毒介导sirnas沉默adamts-5基因治疗骨关节炎的实验分析-experimental analysis of chronic virus-mediated sirnas silencing adam ts - 5 gene in the treatment of osteoarthritis.docx

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慢病毒介导sirnas沉默adamts-5基因治疗骨关节炎的实验分析-experimental analysis of chronic virus-mediated sirnas silencing adam ts - 5 gene in the treatment of osteoarthritis

缩略词表缩略语DMEM英文全称DulbeccosModifiedEagleMedium中文全称达尔伯克必需基本培养基PBSPhosphateBufferedSaline磷酸盐缓冲液ACL-Tanteriorcruciateligamenttransection前交叉韧带切断术Real-timePCRreal-timepolymerasechainreaction实时荧光定量聚合酶链式反应FBSFatalBovineSerum胎牛血清MMPmatrixmetalloproteinases基质金属蛋白酶PMpartialmedialmeniscectomy半月板切除ADAMTSadisintegrinandmetalloproteinasewiththrombospondinmotif带有血小板凝集酶敏感蛋白样模体的解整连蛋白金属蛋白酶rpm：revolutionsperminute每分钟转数OAosteoarthritis骨关节炎ODOpticalDenssity光密度RNA:ribonucleicacid核糖核酸mRNAmessengerribonucleicacid信使核糖核酸TBSTTrisBufferedSalineWithTween脱脂奶粉EDTAethylenediaminotetraaceticacid乙二胺四乙酸FMforcedmobilization强制运动Minminute分钟Hhour小时Secsecond秒中文摘要慢病毒介导siRNAs沉默ADAMTS-5基因治疗骨关节炎的实验研究华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科430030硕士研究生楚翔宇硕士生导师游洪波教授目的：骨关节炎是一种慢性进展性疾病，它的发病机制复杂并且由多种因素介导。骨关节炎的主要特征是关节软骨的退变。ADAMTS-5是关节软骨中的主要金属蛋白酶。利用RNA干扰技术沉默大鼠关节软骨细胞ADAMTS-5的表达，实现OA的基因治疗。方法:(l)取原代SD大鼠关节软骨细胞体外培养并扩增，针对ADAMTS-5基因设计并合成三组siRNA，设置阴性及空白对照组，利用实时荧光定量PCR技术（qPCR）和蛋白免疫印迹（Westernblotting）技术检测沉默效率。选取沉默效率最高的siRNA1并构建慢病毒介导的稳定转染体系。(2)我们通过切断雄性SD大鼠的膝关节前交叉韧带（ACL-T）和外侧半月板切除（PM）并强制其运动，成功的制作大鼠膝关节骨性关节炎模型。术后的雄性SD大鼠（80只，250-300g）接受膝关节腔注射慢病毒载体介导的siRNA1(20μL,1×108TU/mL)。对照组为空病毒载体组。利用国际骨关节炎研究协会评分系统来比较大鼠关节炎的进展。结果:于对照组相比，siRNA1组对体外培养的软骨细胞中的ADAMTS-5沉默效率达到80%。膝关节腔注射慢病毒载体介导的siRNA1在大鼠关节炎模型中引起了ADAMTS-5基因表达的下调。结论单纯的膝关节腔注射慢病毒载体介导的siRNA1可以抑制大鼠关节软骨的退变。这可能为人骨关节炎的治疗提供一个新的方法。关键词：骨关节炎，ADAMTS-5基因，RNA干扰，软骨细胞。Protectiveeffectoflentivirus-mediatedsiRNAtargetingADAMTS-5oncartilagedegradationinaratmodelofosteoarthritisABSTRACTOrthopedicsDepartmentofTongjiHospital,TongjiMedicalSchool,HuazhongUniversityofScienceandTechnologyGraduate:ChuxiangyuSupervisor:ProfessorYouhongboObjective:Theetiologyofosteoarthritis(OA)iscomplexandmultifaceted.Osteoarthritisisachronicandprogressivediseaseofthejointsthatischaracterizedbydegradationofarticularcartilage.Adisintegrinandmetalloproteinasewiththrombopondinmotifs-5(ADAMTS-5)comprisesisthemajoraggrecanaseincartilage.TheaimofthisstudywastoevaluatetheeffectofADAMTS-5knockdownoncartilagedegradation.MaterialsandMethods:Ratarticularchondrocyteswere