慢病毒介导的sncg基因敲除对人结肠癌细胞sw1116裸鼠结肠癌肝转移的影响-effects of sncg gene knockout mediated by lentivirus on liver metastasis of human colon cancer cell sw 1116 in nude mice.docxVIP

下载本文档

27
0
约3.63万字
约 41页
2018-07-27 发布于上海
举报
版权申诉

慢病毒介导的sncg基因敲除对人结肠癌细胞sw1116裸鼠结肠癌肝转移的影响-effects of sncg gene knockout mediated by lentivirus on liver metastasis of human colon cancer cell sw 1116 in nude mice.docx

1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击这里二次下载。
3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次，网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档

慢病毒介导的sncg基因敲除对人结肠癌细胞sw1116裸鼠结肠癌肝转移的影响-effects of sncg gene knockout mediated by lentivirus on liver metastasis of human colon cancer cell sw 1116 in nude mice

目录附录……………………………………………………………………4中文摘要………………………………………………………………5英文摘要………………………………………………………………7前言……………………………………………………………………10材料和方法…………………………………...……………………….121.材料121.1实验材料121.2实验设备121.3主要试剂131.4实验中溶液的配制132.方法142.1结肠癌细胞的常规培养14讨论……………………………………………..……………………31结论………………………………………………..…………………34参考文献……………………………………………..………………35综述……………………………………….……………….………37致谢……………………………………………….……………….…43附录缩略语英文全称中文全称SNCGγ-synucleinγ突触核蛋白CRCColorectalCancer结直肠癌PBSPhosphateBufferedSaline磷酸盐缓冲液FBSFetalBovineSerum胎牛血清DMSODimethylsμlphoxide二甲基亚砜EDTAEthyleneDiamineTetraaceticAci乙二胺四乙酸H-EHematoxylin-eosinstain苏木精-伊红染色SPFSpecificPathogenFree无特定病原体EGFPEnhancedGreenFluorescentProtein增强绿色荧光蛋白IHCImmunohistochemistry免疫组织化学rpmrevolutionsperminutes转/分SDSSodiumDodecylSμlfate十二烷基硫酸钠Ct值Thresholdcyclenumber阈值循环数TBSTrisBufferedSaline三羟甲基氨基甲烷缓冲盐溶液TBSTTrisBufferedSaline-Tween三羟甲基氨基甲烷缓冲盐溶液-吐温PAGEPolyacylamidegelClectrophoresis聚丙稀铣胺凝胶电泳GAPDHGlyceraldehyde-3-phosphateDehydrogenase3-磷酸甘油醛脱氢酶慢病毒介导的SNCG基因敲除对人结肠癌细胞SW1116裸鼠结肠癌肝转移的影响中文摘要目的研究慢病毒介导的SNCG基因敲除对人结肠癌细胞SW1116裸鼠结肠癌肝转移的影响。方法复苏已事先进行SNCG敲除的实验组、转染空质粒的对照组及空白对照的野生型SW1116细胞，并进行传代，培养到一定数量后，RealtimePCR、Westernblot检测各组细胞的SNCG表达情况并进行体外细胞增殖实验、Transwell侵袭实验。培养足够的SW1116细胞后，将获得的肿瘤细胞液种植于裸鼠脾被膜下，采用保脾法，建立人结肠癌裸鼠结肠癌肝转移模型。将21只裸鼠随机分成三组，依次为RNAi组（目的基因敲除组）、NC组（空质粒组）、CON组（空白对照组）。对三组裸鼠于脾下分别注射相同剂量干扰物质（即SNCG-RNAi-SW1116，SNCG-NC-SW1116，SW1116）进行干预，定期观察裸鼠精神活动状态、体重变化、脾脏原位成瘤大小变化，比较三组裸鼠的转移瘤发生部位及数量等。于注射后6周末处死裸鼠，解剖出脾脏原位肿瘤及转移瘤，做好各项指标记录，行HE染色观察肿瘤组织病理改变，免疫组化染色、RT-PCR、Westernblot检测各组肿瘤标本SNCG基因mRNA和蛋白表达情况。结果1、RealtimePCR及Westernblot结果表明，靶向干扰SNCG基因表达的RNAi组细胞在SNCGmRNA及蛋白表达水平较NC组及CON组均明显下降。2、细胞增殖实验、Transwell侵袭实验证实，与NC组及CON组相比，RNAi组细胞SNCG基因的表达被抑制后，细胞的体外增殖、侵袭能力明显下降。3、成功构建裸鼠结肠癌肝转移模型，实验中所成瘤体均经HE染色得到证实。4、与NC组及CON组相比，RNAi组裸鼠移植瘤生长缓慢甚至不生长，原位成瘤率及肝转移率均明显下降，所成瘤体在数量、体积方面亦明显减小，差别具有统计学意义（P0.05）。5、免疫组化、RT-PCR及Westernblot结果显示，RNAi组肿瘤标本与其余两组比较，SNCGmRNA和蛋白表达均明显下降，差别具有统计学意义（P0.05）。结论1、体外实验结果表明，慢病毒载体介导的SNCG基因沉默使SNCG表达降低，同时抑制了细胞增殖与侵袭能力。2、成功建立裸鼠结肠癌肝转移模型。3、裸鼠结肠癌肝转移模型结果表明，SNCG基因沉默表达后可显著降低裸鼠脾脏原位移植肿瘤及转移瘤的数量及体积。4、在体内，重组慢病毒质粒LV-SNCG-RNAi-EGFP构