慢性酒精中毒脑病理形态变化及mcalpain calpastatin表达与tsah死亡机制的关系研究-study on the relationship between brain pathological changes and mcal pai calpastatin expression and tsah death mechanism in chronic alcoholism.docxVIP

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2018-07-27 发布于上海
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慢性酒精中毒脑病理形态变化及mcalpain calpastatin表达与tsah死亡机制的关系研究-study on the relationship between brain pathological changes and mcal pai calpastatin expression and tsah death mechanism in chronic alcoholism

学位论文原创性声明本论文是我个人在导师指导下进行的工作研究及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或其它机构已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在论文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律责任由本人承担。作者签名：日期：年月日学位论文使用授权声明本人授权汕头大学保存本学位论文的电子和纸质文档，允许论文被查阅和借阅；学校可将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存和汇编论文；学校可以向国家有关部门或机构送交论文并授权其保存、借阅或上网公布本学位论文的全部或部分内容。对于保密的论文，按照保密的有关规定和程序处理。本论文属于：保密（），在年解密后适用本授权声明。不保密（）。（请在以上括号内打“√”）作者签名：导师签名：日期：年月日日期：年月日目录中文摘要……………………………………………………………..………….……………I英文摘要……………………………………………………………………...………………V缩略语释义表………………………………………………………………..………………Ⅸ前言……………………………………………………………………………..…..…………1材料与方法…………………………………………………………………..……..…………4结果………………………………………………………………………………..…………11讨论………………………………………………………………………………..…………22结论………………………………………………………………………………..…………29参考文献……………………………………………………………………………………...30附图…………………………………………………………………………..………………35文献综述………………………………………………………………………...……………42附录……………………………………………………………..……………………………53致谢……………………………………………………………..……………….……………54摘要背景与目的酗酒后轻微外力所致的外伤性蛛网膜下腔出血(traumaticsubarachnoidhaemorrhage,TSAH)死亡案件的发生率呈上升趋势，已引起国内外法医学工作者的关注。本课题组建立的大鼠灌酒后TSAH模型稳定性好，前期结果显示慢性灌酒组大鼠TSAH发生率及死亡率分别为81％、76％，远高于急性灌酒组的27％、4.8％(P0.01)。综合相关文献及本课题组前期实验结果分析，认为长期酗酒的中枢神经系统(CNS)累积毒理作用参与了酗酒后TSAH的死亡机制，然而酒精对脑干生命中枢组织形态结构及物质代谢损伤性变化导致酗酒TSAH大鼠迅速死亡的机制尚不十分明确，因此，本课题拟从慢性灌酒大鼠脑干组织m-Calpain/Calpastatin免疫表达与病理形态变化的关联性角度，探讨长期酗酒后TSAH迅速死亡的机制。材料与方法1实验动物及分组情况CL级雄性SD大鼠65只，体重300±30g，分笼常规饲养，随机分：单纯灌水组(W)10只、灌水+打击组(WH)10只、单纯灌酒组(A)10只、灌酒+打击组(AH)29只、灌酒+停酒组(AS)6只。连续灌胃食用水或白酒(52%v/v北京红星二锅头)4周，剂量：前2周8ml/kg/次、后2周12ml/kg/次，每天9:00和16:00间隔7h两次灌酒。2实验方法各组大鼠4周后分别处置：单纯灌水组(W)和单纯灌酒组(A)均戊巴比妥腹腔注射麻醉后股动脉放血处死；灌水+打击组(WH)和灌酒+打击组(AH)使用自制单摆式打击装置给予脑震荡性打击，同时监测心电15min，其中灌酒+打击组(AH)中死亡的大鼠归为灌酒打击死亡组；灌酒+停酒组(AS)连续灌胃4周后，停酒常规饲养4周，戊巴比妥腹腔注射麻醉后股动脉放血处死。开颅取全脑，正中矢状切取大脑+脑干+小脑，左侧半脑常规制备石蜡连续切片，行HE、甲苯胺蓝及m-Calpain、Calpastatin免疫组织化学染色，光镜观察组织病理形态，病理真彩色图像分析系统4.0(CMIASWIN)观测、采图，Image-ProPlus6.0图像分析软件测量累积积分光密度(总IOD)和平均积分光密度(平均IOD)。3统计分析所有数据均采用均数±标准差(x±s)表示，通过SPSS17.0及Excel2003分析处理实验数据，检验方法采取方差分析(ANOVA)、独立样本T检验、卡方检验。统计学检验所得值差异显著性采用P0.05、P0.01表示。结果1一般情况及TSAH发生率及死亡率大鼠灌酒1周后体重下降(P0.05)；约两周后相继出现毛发粗糙、灰黄、脱落、无光泽、精神萎靡、两眼混暗无光，进食