亲鱼免疫对大菱鲆后代免疫能力的影响-effect of parent fish immunity on immunity of turbot offspring.docx

免疫亲鱼对大菱鲆后代免疫能力的影响摘要本研究旨在研究免疫大菱鲆亲鱼对后代免疫因子基因表达和蛋白含量的影响及对后代抗病菌的能力。同样对大菱鲆繁殖期间精浆中的氧化物和抗氧化物及免疫因子的变化对精子质量的影响也进行了相关研究。实验采用实时定量PCR对对照组和免疫组亲鱼的卵、受精后1d,2d,3d,4d,5d的胚胎和孵化后5d,15d,25d,40d,55d的幼仔鱼检测免疫基因IgM,C3,TGF-β1,IL-1β,lysozyme和transferrin的表达情况。采用ELISA试剂盒对来自对照组和免疫组亲鱼的卵、受精后1d,5d的胚胎和孵化后5d,15d,25d,40d,55d的幼仔鱼检测上述免疫因子的蛋白含量变化进行测定。对两种不同处理的受精后4d的胚胎和孵化后14d的幼仔鱼在攻毒实验中的存活率及对照组和免疫组亲鱼的受精后1d及5d胚胎和孵化后5d,15d,25d,40d和55d的幼仔鱼后代匀浆对鳗弧菌的抑菌率也进行了实验及统计。并采用常规试剂盒和ELISA试剂盒对大菱鲆繁殖期间精浆中的氧化物和抗氧化物及免疫因子的变化进行测定，其对精子质量的影响也进行了相关性分析。结果显示，在大菱鲆中存在基因和蛋白两种方式的母源传递现象。在基因水平上，在孵化期间即从未受精卵到受精后5天内，以上免疫相关基因在免疫组亲鱼后代中表达量要显著高于在对照组亲鱼后代中。除转铁蛋白外，其余的免疫基因在未受精卵中的相对表达水平高于受精第1天的胚胎，孵化后，除TGF-β1外，这种高的相对表达水平现象消失。在蛋白质水平上，在未受精卵到孵化55天，免疫组亲鱼后代材料中IgM水平大于对照组亲鱼后代。两种处理的亲鱼未受精卵中IgM水平高于受精1d的胚胎，且从受精5d到孵化40d，IgM水平逐渐升高，到孵化55d时，有小幅度下降。免疫组亲鱼未受精卵中补体C3水平稍高于对照组亲鱼未受精卵，且未受精卵中补体C3水平稍高于受精1天的胚胎，从未受精卵到孵化25d，补体C3的含量保持相对稳定，在孵化后40-55d时，幼仔鱼中C3的水平有大幅度的升高，但各时期下对照组和免疫组材料之间不具有显著差异性(P0.05)，与C3相似的还有IL-1β和转铁蛋白。TGF-β1在对照组亲鱼的未受精卵和受精1d胚胎中表达水平高于免疫组后代鱼材料，且两组不同处理亲鱼的未受精卵中的TGF-β1含量均高于受精1d的胚胎，孵化后，总体上，TGF-β1在两种不同处理亲鱼的的幼仔鱼中的含量均呈逐步升高的趋势。溶菌酶在孵化初期的免疫组亲鱼后代材料中水平远高于对照组，而从孵化后15-55d，对照组亲鱼后代的幼仔鱼中C3水平远高于免疫组亲鱼后代。I攻毒实验显示，非攻毒条件下，免疫组和对照组受精后4d的胚胎孵化比率不具有显著差异性(P0.05)；攻毒条件下，对照组与免疫组亲鱼后代孵化比率之间具有显著差异性(P0.05)。对照组和免疫组亲鱼孵化14d幼仔鱼在非攻毒条件下的存活率具有显著差异性(P0.05)。在攻毒条件下，两者的存活率具有显著差异性。免疫组幼仔鱼比对照组后代幼仔鱼具有更高的抑菌率，且具有显著差异性。综合上述实验，发现对大菱鲆亲鱼在进入繁殖期之前进行免疫能促进对后代免疫因子在mRNA和蛋白水平的母源传递的过程，并能促进孵化过程中免疫基因的自身表达，增强后代抵抗病菌的能力。对精液中超氧化物歧化酶(SOD)，过氧化氢酶(catalase)，谷胱甘肽还原酶(GR)，维生素C，维生素E进行测定发现上述抗氧化物在精浆中的含量要远高于在精子中的含量，并在精子质量最高时含量最高，同样过氧化氢和超氧阴离子在精子质量最差时最高，相干性分析显示GR与精子活化率，直线运动速度和曲线运动比值和ATP含量呈最大正相关。对精浆中的免疫因子进行测定，发现除精浆蛋白水解酶外，免疫球蛋白IgM、补体C3、转移生长因子TGF-β1、白介素IL-1β、溶菌酶和转铁蛋白均在精子质量最差时达最低水平，同样相关性分析发现补体C3和免疫球蛋白IgM与精子活化率及直线运动速度和曲线运动比值呈最大正相关。关键词：亲鱼免疫；免疫因子；实时定量PCR；鳗弧菌IITheeffectofvaccinatingthebroodstocksontheimmunityofturbotoffspringAbstractThestudywasdesignedtoexploretheeffectofvaccinatingturbotbroodstocksontheimmunityofoffsprings.TheexpressionofIgM,C3,TGF-β1,IL-1β,transferrin,lysozymeandtheirconcentrationsweredetectedrespectivelywithquantitivereal-timePCRandElisakits