犬细小病毒vp2基因的克隆 表达及其重组蛋白的抗原性分析-cloning and expression of canine parvovirus vp2 gene and antigenicity analysis of its recombinant protein.docxVIP

新疆农业大学硕士学位论文 新疆农业大学硕士学位论文 犬细小病毒 犬细小病毒 VP2 基因的克隆、表达及其重组蛋白的抗原性研究 PAGE PAGE 11 PAGE PAGE 10 第 1 章 犬细小病毒研究进展 犬细小病毒感染是由犬细小病毒(Canine parvovirus，CPV)引起的一种高度接触性传染 病。该病几乎分布于全世界，所有养犬国家均有本病发生。近年来，随着我国军犬、 警犬、实验用犬和宠物犬饲养量的大幅度增加，以及异地交流机会的增多，我国犬中 细小病毒的发病率和致死率均有升高的趋势，该病的流行频度、流行区域逐渐扩大， 已成为严重威胁养犬业健康发展的重要疾病之一。 1.1 犬细小病毒病原学特征 形态特点 CPV 属于细小病毒科(Parvoviradae)细小病毒属 (Parvovirus)[1]。病毒粒子呈圆形， 直径 20~24nm，二十面体对称，无囊膜，由 32 个壳粒组成。CPV 病毒基因组两端各有 6~10 个回文序列，组成发夹样的回文结构[2] 。病毒编码 3 种结构多肽(VP1，VP2， VP3)，其中 VP2 蛋白是 CPV 衣壳蛋白的主要亚单位组分。 图 1-1 细小病毒的 20 面体结构 理化性质 CPV 由单股 DNA 组成，DNA 的分子质量为 1.4× 106~1.7× 106，DNA 重量约占整 个病毒粒子重量的 25%~34%，沉淀系数为 23 S~27S。当氯化铯密度梯度离心沉淀时， 大部分感染性病毒粒子的浮力密度为 1.38~1.42g/cm3，小部分感染性病毒粒子的浮力密 度为 1.45~1.47 g/cm3，而空衣壳和含有不完整 DNA 基因组的病毒粒子的浮力密度为 1.30~1.32 g/cm3 和 1.35~1.37 g/cm3[3]。 CPV 对外界环境抵抗力较强，能抵抗 65℃的高 温。pH3~11 范围内都能存活；对乙醚、氯仿、醇类和去氧胆酸盐有一定的抵抗性[4-5]。 CPV 最有效的消毒剂有福尔马林、?-丙内酯、次氯酸钠氧化剂等。此外，紫外线也能 将其灭活[6]。 1.1.3 病毒的血凝性 1979 年研究人员发现 CPV 具有血凝性，能凝集猪、非洲绿猴、犬、马、猫、绵 羊的红细胞[7-9]。这一特性可作为病毒鉴定的参考指标[10]。病毒经福尔马林处理后，其 血凝性没有发生本质的变化。众多学者研究证实，犬细小病毒与猫泛白细胞减少症病 毒 (Feline panleukopenia virus，FPV)、水貂肠炎病毒(Mink enteritis virus，MEV)之间 有共同的抗原成分。血清学实验发现 CPV 与 FPV、MEV 之间存在交叉反应现象，但 又有独立的抗原组成。根据血凝活性，CPV 被分为温度依赖性和温度独立性血凝性。 在 1976~1978 年间分离的 CPV-2a 属于前者，1979 年以后分离的 CPV-2b 属于后者[11]。 研究人员不但研究出温度对 CPV 血凝性有影响外，而且还发现 pH 值对 HA 也有一定 影响。CPV 与 FPV、MEV 三种病毒凝集红细胞最适 pH 值为 5.8~6.0，但 CPV 在 pH7.2 时与红细胞结合能力强，而 FPV、MEV，在 pH＞6.4 时血凝活性显著降低。还 有当 pH＜6.5 时，猪的红细胞又易发生自凝。pH 对血凝性影响主要取决于 323 位残基 和 375 位残基，病毒衣壳蛋白空间结构的不同。如果 323 位残基和 375 位残基是天冬 酰胺则具有 CPV 的血凝性，如果 323 和 375 不是天冬酰胺则没有凝血性[12]。 根据报道显示，在相同的条件(红细胞、温度、pH 值)下，CPV 的血凝(HA)滴度最 高，比 FPV 和 MEV 至少高出 8 倍。CPV 还能凝集马和仓鼠的红细胞[13]。Senda 等[14]报 道，应用硼酸盐缓冲溶液和病毒调节稀释剂能凝集犬和绵羊的红细胞，但不能凝集 牛、山羊、兔、豚鼠、大鼠、小鼠、地鼠、鸡、鹅和人的 O 型红细胞。 1.1.4 抗原性 CPV-2是继Binn等1967年从犬中分离到的第二种细小病毒，它与Binn早期从健康犬 分离的犬极小病毒(Minute virus of canine，MVC)在发病机理上明显不同，抗原性上也 有很大差异[15]。CPV在出现后的几年时间内发生了抗原漂移，在抗原性、宿主范围和 血凝性上都发生了变化，CPV已经出现了不同亚型，即CPV-2a、CPV-2b、CPV-2c(a)和 CPV-2c(b)[16]。Parrish等报道，1978~1980年分离的毒株是CPV-2型。Parrish等提出将新 的毒株命名为CPV-2a，以显示是CPV-2的亚型[17] 。另一新抗原变异株C