桑色素对酪氨酸酶 黄嘌呤氧化酶抑制机理探讨-mechanism of mulberry pigment inhibiting tyrosinase xanthine oxidase.docxVIP

摘要4.采用多种光谱方法结合分子模拟技术，研究了山奈酚对黄嘌呤氧化酶的抑制机理和木犀草素对山奈酚抑制黄嘌呤氧化酶活性的影响。实验结果表明，山奈酚是一种有效的可逆性黄嘌呤氧化酶抑制剂，能够与底物黄嘌呤竞争性的结合到黄嘌呤氧化酶的活性位点，其IC50和Ki分别为(2.18±0.02)×10?6mol/L和(6.77±1.02)×10?6mol/L。山奈酚通过静态猝灭过程与黄嘌呤氧化酶形成基态复合物，疏水作用是主要驱动力。山奈酚引起黄嘌呤氧化酶中酪氨酸和色氨酸残基所处微环境的极性增强，疏水性降低，α-螺旋和无规则卷曲的含量降低，β-折叠和β-转角含量升高。分子模拟结果显示，山奈酚插入到黄嘌呤氧化酶的疏水空腔，与周围的一些主要氨基酸残基如Glu802、Leu873、Phe914、Arg880、Phe1009、Thr1010、Val1011、Leu1014和Pro1076等发生作用，并与Asn768和Luz1(与Mo原子相连的辅酶因子)形成了两个氢键。山奈酚对黄嘌呤氧化酶的抑制作用机制很可能是因为山奈酚插入到黄嘌呤氧化酶的活性位点，不但占据了黄嘌呤氧化酶的催化中心，阻碍了底物黄嘌呤的进入，还诱导黄嘌呤氧化酶的构象发生变化，直接导致黄嘌呤氧化酶的催化活性的降低。此外，研究还发现，在山奈酚浓度为0.5×10–6mol/L，山奈酚浓度为2.0×10–6mol/L、木犀草素浓度为1.0×10–6或5.0×10–6mol/L，山奈酚浓度为8.0×10–6mol/L、木犀草素浓度为1.0×10–6mol/L时，它们对黄嘌呤氧化酶的抑制具有协同效应，推测山奈酚和木犀草素均能结合到XO的活性中心，更大程度的占据了XO与底物黄嘌呤的结合位点，并且两者都引起了XO构象的变化，更加不利于XO活性中心的形成。关键词：桑色素；酪氨酸酶；黄嘌呤氧化酶；抑制动力学；相互作用；协同作用AbstractForalongtime,thehumanbodyskindiseasessuchaschloasma,agespots,pregnancyspotsetc.,arecommondiseasesthattroubledpeople,thus,theresearchofwhiteningcosmeticsandfoodshasreceivedthewidespreadattentionanddevelopment.Gout,adiseasecausedbyexcessiveuricacid,hasbeenlistedtobeoneoftop20persistentailmentofthe21stcenturybytheUnitedNations.Theincidenceofgoutincreasedyearbyyearinourcountryfortheimprovementoflivingstandard,speedingupofliferhythmandunreasonableofpeoplesdietstructure,anditisnowhigherthantheworldaverage.Ithasbeenreportedthat,inhumanbody,tyrosinaseismainlytocatalyzetheorganismtogeneratemelanin,anditsoverexpressionwouldleadtoexcessiveaccumulationofmelanin,andthencauseskindisorders.Thus,itisanimportantmeanofspotwhiteningtoinhibittheactivityoftyrosinase.Xanthineoxidaseisakeyenzymeintheprocessofproducinguricacidandaimportantfactorofgeneratinggoutinhumanbody.Therefore,itisoneofthemainwaysfortheclinicaltreatmentofgoutthatinhibittheactivityofxanthineoxidasewhentakingitasthedrugtargets.Inrecentyears,thescientificworkershavemadecertainachievementsinthesynthesis,researchanddevelopmentofspotandanti-goutdrugs.However,mostofthesyntheticdrugshavecertainsideeffects,whichlimittheirapplicationtoacertainextent.