医学43 中药制剂分析其他定量方法ppt课件.ppt

;大纲要求;可见-紫外分光光度法;可见-紫外分光光度法;要求： 选择被测成分的ymax为测定波长，而共存组分在此波长处基本无吸收，并控制供试液的吸收度读数在0.3-0.7之间 方法： 1.吸收系数法 2.对照品比较法 3.标准曲线法;1.吸收系数法：测定供试品溶液在规定波长处的吸收度，根据被测成分的吸收系数计算其含量 A=E·C·L;可见－紫外分光光度法;可见－紫外分光光度法;可见－紫外分光光度法;类型： 1.双波长法（等吸收点法和系数倍率法） 2.三波长法 3.导数光谱法;ａ为干扰组分的吸收光谱 ｂ为待测组分的吸收光谱 ｃ为混合组分的吸收光谱 关键步骤： 选择λ1和λ2的基本条件 干扰组分在λ1和λ2处应具有相同的吸收度 待测组分在这两个波长处的吸收光度差值应足够大;分析步骤 ① 选择双波长（λ1、λ2） ② 绘制标准曲线 △Ａ对浓度Ｃ作图（回归） 样品测定 λ1、λ2，分别测定Ａ1及Ａ2 △Ａ 应用条件： 吸收曲线有峰和谷;图1－4可用双波长消除杂质干扰，直接测定 但图5－10，无杂质的等吸收点 能否采用等吸收双波长法？ 能否采用双波长法？;测定步骤 1.UV光谱测定：测定供试品溶液、对照品溶液、干扰组分（阴性样品）溶液的UV光谱。 2.波长选择：根据上述测得的三个光谱特征，选择适宜的测定波长； 3.标准曲线绘制：用对照品配制5-7种不同浓度的溶液，分别测定其响应值，得回归直线方程（r≥0.999）。 4.样品测定:配制被测组分浓度处于标准曲线线性范围内的样品溶液，测定各所选波长处的吸收度;应用;中药制剂教研室;硝酸钾－三氯化铝与黄酮显色后其最大吸收波长为420nm， 亚硝酸钠－硝酸铝显色液最大吸收波长为500nm，二者皆可用于总黄酮的含量测定;;TLC大纲要求;中药制剂教研室;薄层扫描法;TLCS基本原理;;TLCS基本原理;薄层扫描原理;Kubelka-Munk理论原理;SX：薄层板的散射参数，它与固定相的种类、粒度、薄层厚度(X)及涂布均匀程度有关；其数值大小直接影响薄层色谱斑点的吸光度-浓度曲线偏离Beer定律的情况（SX=0) ;理想的空白薄层板(简称空白板)：单位薄层厚度的吸光系数K=0。 一般空白板：K≠0 ;Kubelka-Munk 曲线校直;曲线校正法校直Kubelka-Munk 曲线，须知薄层板SX 值，Merck硅胶板SX=3，Merck 预制氧化铝板SX=7，Wako预制硅胶FM(硅胶GF254)板SX=7 曲线校直法比较粗糙，难于准确知道薄层板 SX值 为了降低定量误差，使对照品的色谱峰峰面积供试品的色谱峰面积接近为好 ;TLCS基本原理;薄层扫描法试验选择;薄层扫描法试验选择;薄层扫描法试验选择;薄层扫描法试验选择;TLC定量分析方法学考察;外标法（最常用） 内标法 ;影响薄层扫描定量的因素;２、点样：是薄层定量误差的主要来源 点样必须准确 （１）原点直径以１～３mm为宜； （２）点样量应适当： 斑点拖尾 过多“超载” 重叠 峰形不对称 （３）“随行标准”：标准品与样品应交叉点于同一块板展开，可降低色谱误差 ;３、展开条件：溶剂应纯度好 展开前应先饱和 温度恒定 展距与Ｒf值适当 ４、显色：应均匀，注意显色后斑点的稳妥定性 ５、薄层扫描：操作参数合理，扫描光束大小应根据色斑大小设定；扫描方向应与展开方向平行等;2010版药典：HPLC法定量黄连;中药制剂教研室;;;;大纲要求;概念（掌握） 荧光分析法(Fluorime-try)根据荧光强度测定物质的含量的定量方法。 荧光物质分子都具有两个特征光谱：激发光谱和荧光光谱，是荧光分析中定性与定量的依据和基本参数。 ;特点 灵敏度高(检测限可达10-10～10-12g/ml) 选择性好、试样量少(几十微克或几十微升) 可提供较多的荧光参数(激发光谱、发射光谱、荧光强度、荧光寿命等) 具有天然荧光的物质数量不多 干扰因素较多且实验条件严格;适应范围 本身具有荧光的中药及制剂 衍生化后能产生荧光的中药及制剂 具有荧光的化学成分：胺类、甾体类、蛋白质、氨基酸、酶等; 能发射荧光的物质须同时具备两个条件：即物质分子必须有强的紫外－可见吸收和较高的荧光效率，物质能否发射荧光及发射荧光的强度，取决于物质的分子结构及物质所处的外部环境;影响荧光强度的因素;溶剂 溶剂的极性显著地影响荧光物质的荧光强度 极性↑，n-π共轭的荧光物质，荧光强度↓；π—π共轭的荧光物质，使荧