水稻锯齿叶矮缩病毒对磷代谢影响-effect of rice sawtooth leaf dwarf virus on phosphorus metabolism.docxVIP

独创性声明本人声明，所呈交的学位（毕业）论文，是本人在指导教师的指导下独立完成的研究成果，并且是自己撰写的。尽我所知，除了文中作了标注和致谢中已作了答谢的地方外，论文中不包含其他人发表或撰写过的研究成果。与我一同对本研究做出贡献的同志，都在论文中作了明确的说明并表示了谢意，如被查有侵犯他人知识产权的行为，由本人承担应有的责任。学位（毕业）论文作者亲笔签名：日期：论文使用授权的说明本人完全了解福建农林大学有关保留、使用学位（毕业）论文的规定，即学校有权送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅;学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。保密，在年后解密可适用本授权书。□不保密，本论文属于不保密。□学位（毕业）论文作者亲笔签名：日期：指导教师亲笔签名：日期：目录摘要IAbstractII第一章文献综述11.水稻锯齿叶矮缩病毒的研究进展11.1水稻锯齿叶矮缩病毒的分布概况11.2水稻锯齿叶矮缩病毒的研究进展21.2.1症状表现21.2.2寄主范围31.2.3传播介体与传播途径41.2.4水稻锯齿叶矮缩病毒病的防治4RRSV的分类地位5RRSV的结构和基因组51.3水稻缺磷症的研究进展91.3.1水稻缺磷症的症状表现91.3.2水稻对低磷诱导91.3.3磷信号传导途径的研究进展101.4.1水稻遗传转化的历史和现状131.4.2农杆菌介导的转化机理151.4.3转基因水稻的应用16MicroRNA的发现17MicroRNA生物学功能17第二章RRSV发病植株与健康植株的磷含量测定202.1引言202.2材料与方法202.2.1植物和动物材料202.2.2实验用具202.2.3试剂和溶液202.2.4仪器设备212.3本实验所采用的基本方法212.3.1获得毒株212.3.2硫酸-过氧化氢法提取水稻总磷212.4实验结果与分析232.5小结与讨论27第三章荧光定量检测磷通路中关键基因的表达量283.1引言283.2材料与方法283.2.1实验材料283.2.2方法293.2.3实验结果与分析313.3小结与讨论33第四章农杆菌介导的Os-MiR399的遗传转化354.2材料与方法354.2.1实验材料354.2.2方法364.2.3重组质粒转化农杆菌EHA105374.2.4含有重组质粒的农杆菌EHA105的鉴定方法384.2.5农杆菌介导的水稻遗传转化394.3实验结果与分析404.3.1Os-MiR399序列对比和进化树构建404.3.2含有重组质粒的农杆菌EHA105的鉴定424.3.3转基因植株的获得424.4小结与讨论45第五章总结与展望475.1RRSV植株与健康植株的磷含量测定研究475.2利用农杆菌介导的转基因实验验证RRSV对水稻代谢的影响48参考文献49附录1．转基因培养基的配方57附录2．缩略语及含义60致谢61摘要水稻锯齿叶矮缩病毒病（Riceraggedstuntvirus，RRSV）是近几年危害较为严重的水稻病害之一。该病害主要发生在东南亚、东亚和南亚的一些国家部分地区，并且造成巨大的损失，最严重时节发病率100%。RRSV是呼肠孤病毒科（Reoviridae）水稻病毒属（Oryzavirus）的典型成员。从基因组的角度来说，RRSV由10条双链RNA组成，并分别被命名为S1-S10，这10个基因分别编码11种蛋白质且功能各不相同。RRSV的症状与水稻缺磷的症状十分相似，推测可能RRSV与水稻磷代谢具有相关性。本课题首先通过田间实验得出结论：RRSV发病水稻中无论是茎、叶部分的磷含量还是根部的磷含量均明显低于健康水稻中相应部位的磷含量。由此推测RRSV可能与水稻磷代谢有着一定的关系。其次我们挖掘了7个磷转运过程中的关键基因TRXH，PHR2，PSS1，PHO1，SPX1，SPX4，Os-MiR399，并用real-timePCR检测了各个基因在病株和健株中表达量的差异，结果显示这7个基因在健康水稻中的表达量明显高于感染RRSV的病株中的表达量。由此推测RRSV可能影响磷转运通路中各个基因的功能，使得水稻的磷代谢受阻，进而导致水稻对磷的吸收量的降低。由于Os-MiR399是磷通路中最主要的基因，在磷通路过程中起着传递信号和接收信号的双重作用，Os-MiR399功能的异常直接影响磷的代谢过程，最后本实验选用Os-MiR399的4个前体MiR399作为研究对象，进行转基因实验，将Os-MiR399过表达，并已育出转基因植株。关键词：RRSV；磷含量测定；荧光定量PCR；Os-MiR399；转基因AbstractRiceraggedstuntvirus（RRSV）isoneofthemostseriousricediseasesinrecentyears.Sinceitwasdiscov