山东省日照地区h9亚型aiv的分离 鉴定及ha基因的序列分析-isolation and identification of h9 subtype aiv and sequence analysis of ha gene in rizhao region of shandong province.docxVIP

中文摘要禽流感是由A型流感病毒引起的禽类传染病，临床表现为呼吸道感染，产蛋量下降，头颈水肿和腹泻。H9亚型禽流感为低致病力禽流感，能引起少量死亡或不死亡，表现为生长障碍和产蛋量下降。H9亚型禽流感病毒(AIV)在包括我国在内的东南亚及世界许多国家分布广泛，中国大陆1994年首次公开报道从鸡群中分离到H9亚型AIV，随后便在一些地区形成小规模的流行，未波及全国。但1998年春夏开始的H9亚型禽流感在短短的几个月时间内就形成波及20多个省区的全国范围大流行，给我国的养禽业造成了巨大的经济损失。1998年以来我国发生的H9亚型AI传播效率高、速度快和范围广，1999年又从人类病毒中分离出H9亚型AIV，对于它存在的潜在危害已经越来越多的受到关注。本试验从山东省日照地区发生疑似禽流感的病死鸡脏器中分离出4株H9亚型禽流感病毒，并对其进行了生物学特性研究和HA基因的序列分析。旨在了解分离的4株H9亚型禽流感病毒的毒力及HA基因的变异，从而为更好的预防控制H9亚型禽流感病毒提供一定的理论基础。试验一H9亚型AIV的分离鉴定及生物学特性研究本试验从临床表现症状疑似禽流感的病死鸡脏器中分离得到4株H9亚型禽流感病毒，命名为SDRZ1、SDRZ2、SDRZ3、SDRZ4株。首先通过血凝特性的测定、鸡胚致病力的测定、鸡胚平均死亡时间的测定和1日龄雏鸡脑内接种指数测定等方法对10株禽流感H9亚型毒株的致病力进行分析和比较。结果表明，从山东日照地区分离到的4株禽流感H9亚型毒株的致病力不强，其HA效价在28~29之间，EID50在10-6.15/0.2mL~10-8.69/0.2mL之间，其中SDRZ2毒株的EID50为10-8.69/0.2mL，表出较其它3株病毒强的致病力，其它3株病毒的EID50在10-6.15/0.2mL~10-6.57/0.2mL之间。这4株病毒的鸡胚平均死亡时间差异不大，在90.0h~103.2h之间。其中SDRZ2毒株的鸡胚平均死亡时间最短为90.0h，说明该病毒的致病力较强；而其他病毒的鸡胚平均死亡时间都在90h以上，说明它们的致病力较弱。攻毒鸡胚孵化出的雏鸡和攻毒雏鸡均出现了明显的剖检症状。试验二4株H9亚型AIVHA基因克隆测序及序列分析本研究采用RT-PCR方法成功扩增出了4株H9亚型AIV的HA基因片段。序列分析结果表明，扩增获得的基因片段长度为549bp。核苷酸和氨基酸序列同源性分析表明，这4株毒株彼此关系密切，同源性在93.7%以上，与山东省2003年分离的H9亚型AIV同源性为94.5%，并没有随着时间和地区的不同而发生较大的变异。与国内其它省份H9亚型AIV同源性为78.9%~96.9%。系统进化树分析结果表明，这4株毒株与山东、广州、南京、河北H9亚型AIV毒株亲缘性较近，属于同一分支。由此可见山东地区H9亚型禽流感的发生和流行与广州、南京、河北地区H9亚型禽流感病毒的发生密切相关。关键词：H9亚型禽流感病毒；生物学特性；HA基因ABSTRACTAvianinfluenzaiscausedbyinfluenzavirustypeAwiththeclinicalmanifestationsrespiratoryinfection,eggdropping,alviprofluviumandsoon.H9subtypeavianinfluenzaislow-pathogenicityavianinfluenza.Itcanresultineggdropping,growthretardationandasmallquantitydeath.ThefirstH9avianinfluenzaviruswasisolatedfromchickensinsouthernChinain1994,sincethenitwasprevalentinSoutheastAsiaincludingChinaandmanyothercountriesworldwideforseveralyears.However,thepandemicofH9subtypeAI,whichbrokeoutinsummer,1998,spreadveryrapidlytomorethan20provinceswithinseveralmonths.SincetheAIVsofH9subtypeinpoultryhavebeenconfirmedworldwide,theyhavethecharacteristicofhighefficiency,spreadandwiderangeinChinaafter1998,andAIVofH9subtypeinhumanhadbeendiscoverdin1999,itraisedgreatconcern