水稻短根突变体osksr4基因的克隆及功能的初步分析-cloning and functional analysis of osk sr 4 gene from rice short-root mutant.docxVIP

宁波大 宁波大学硕士学位论文 水稻短 水稻短根突变体 Osksr4 基因的克隆及功能的初步研究 万方数据 万方数据 万方数据 万方数据 水稻短根突变体 Osksr4 基因的克隆及功能的初步研究 摘 要 β-酮脂酰-ACP 合酶在脂肪酸代谢中发挥重要作用，同时也影响了水稻根系的生长 发育。我们从水稻中克隆获得一个控制水稻根系长度的 OsKSR4 基因。该基因位于第 6 染色体上，由 465 个氨基酸组成，编码一个大小为 49kD 的 β-酮脂酰-ACP 合酶（KASI）。 它包含 7 个外显子和 6 个内含子，点突变（C 突变为 T）发生在 ATG 后 770bp 处。 该基因的突变严重影响植株的生长发育，尤其是水稻根系，突变体主根长度不及野 生型的 15%，侧根和不定根伸长也受到抑制，分蘖数减少，花粉活力降低，结实率下降， 产量降低，叶片宽度减少。染色实验发现突变体分生区长度仅为野生型的 60%，且积累 了大量的活性氧；树脂切片显示突变体根尖细胞长度减少，伸长区和成熟区的细胞排列 较规则。我们认为，基因的突变导致活性氧在根尖分生区和侧根的累积，影响了伸长区 细胞的伸长和成熟区细胞的发育，导致根系变短。 半定量 RT-PCR 和 GUS 染色分析表明，OsKSR4 基因在根、茎、叶、花和种子上都 有表达，除花外其他表达都较强，可见该基因呈组成型表达。把 P35S::OsKSR4::GFP 载体 轰击到洋葱表皮细胞，最终将该蛋白定位在质体上。 脂质含量测定与组分分析实验证实该基因参与了脂肪酸的合成调控途径，影响某些 脂肪酸的去饱和途径，同时也影响了甾醇的含量。具体的调控方式目前尚不清楚，还需 对此做进一步的深入研究。由于 Osksr4 突变体叶片基本正常，但根系发育受到明显的 抑制，与已发现的拟南芥 kasI 突变体的表现不太相似，推测 KASI 基因在单子叶和双子 叶植物中的调控方式可能不太一致。 关键词：水稻， 短根， OsKSR4， β-酮脂酰-ACP 合酶 I The Gene Cloning and Function Study of a Short Root Mutant Osksr4 In Rice Abstract β-ketoacyl-ACP synthase plays an important role during the fatty acids synthesis and the development of rice roots. Located on chromosome 6 , OsKSR4 has been cloned to control rice root length. OsKSR4 has seven exons and six introns, and encodes a 49KDa of β- ketoacyl -ACP synthase with 465 amino acids. There is a point mutation (C→T) at 770bp after the ATG. Gene mutations affects the growth of rice root severely. The root length of mutant is shorter than 15% of wild-type, that of lateral root and adventitious root are shorter, too.The tillers number and pollen viability are reduced, so are setting rate, yield and the width of leaf. There is a large amount of active oxygen in meristematic zone, and the length is just 60% of wild type. Although the length of the root tip cells is shorter, the cell arrangement of elongation zone and mature zone are more regular. These results suggest that it is the acculation of active oxygen in meristematic zone that affects the elongation of elongation zone cell and cell development of maturation zone cell. Semi-quantita