双孔钾通道task-1在缺氧性肺血管收缩中的作用及机制分析-role and mechanism of double-hole potassium channel task - 1 in hypoxic pulmonary vasoconstriction.docxVIP

双孔钾通道TASK-1在缺氧性肺血管收缩中的作用及机制研究中文摘要目的：1.观察双孔钾通道TASK-1在缺氧所致肺动脉血管环张力改变中的作用。2.探讨双孔钾离子通道TASK-1介导缺氧性肺动脉收缩可能的机制。方法：从胸心外科手术室获得肺肿瘤患者切除的肺组织，然后分离三、四级肺动脉分支,制成肺动脉环，采用RM-6000多导生理记录仪，观察经c-Src抑制剂PP2、PP2类似物PP3、酪氨酸磷酸酯酶抑制剂bpv预处理后，对缺氧所致血管环张力改变的影响及TASK-1抑制剂A-293预孵育（100μM）后PP2对缺氧所致动脉环张力改变的影响。经组织块培养法获取原代培养人肺动脉平滑肌细胞（humanpulmonaryarterysmoothmusclecells，hPASMCs），经间接免疫荧光染色方法鉴定。第3至第6代用于膜片钳实验，观察缺氧、A-293、PP2、PP3、bpv预处理后对TASK-1电流的影响。结果：1.在适宜前负荷下，肺动脉应用TASK-1抑制剂A-293后，A-293抑制肺动脉缺氧性收缩反应，血管张力从1382±263mg降至1138±219mg，p0.05。2.在适宜前负荷下，肺动脉应用c-Src抑制剂PP2、PP3、bpv后，c-Src抑制剂PP2抑制肺动脉缺氧性收缩反应，血管张力分从1379±231mg降至1103±215mg，p0.05；PP3对肺动脉缺氧性收缩反应无影响，血管张力从1403±203mg降至1381±198mg，P0.05；酪氨酸磷酸酯酶抑制剂bpV增强肺动脉缺氧性收缩反应，血管张力从1351±213mg升至1632±253mg，p0.05。3.在适宜前负荷下，肺动脉应用A-293预孵育后加入PP2，PP2对肺动脉缺氧性收缩反应无影响，血管环张力1412±264mg至1356±243mg，P0.05。4.缺氧可逆性明显抑制肺动脉平滑肌细胞TASK-1电流（电流密度从0.57±0.06pA/pF至0.27±0.04pA/pF，p0.01），而TASK-1抑制剂A-293可阻断该抑制效应。5.c-Src特异性抑制剂PP2预处理后，肺动脉平滑肌细胞缺氧敏感性TASK-1电流消失（电流密度从0.28±0.04pA/pF至0.26±0.05pA/pF,P0.05）；但是PP2类似物PP3预处理后，缺氧仍然可逆性抑制肺动脉平滑肌细胞TASK-1（电流密度从0.58±0.04pA/pF至0.25±0.06pA/pF，p0.01）。此外，酪氨酸磷酸酯酶抑制剂bpv预处理后，肺动脉平滑肌细胞TASK-1电流明显增加（电流密度从0.57±0.06pA/pF至0.74±0.07pA/pF,p0.01），缺氧可明显抑制该电流（电流密度从0.74±0.07pA/pF至0.26±0.05pA/pF,p0.01）结论:1.双孔钾通道TASK-1参与人肺血管缺氧性收缩反应。2.双孔钾通道TASK-1介导人肺血管缺氧性收缩反应的过程具c-Src依赖性。3.缺氧可逆性抑制肺动脉平滑肌细胞TASK-1电流。4.酪氨酸激酶c-Src可调控双孔钾通道TASK-1。5.双孔钾通道TASK-1对人肺血管缺氧性收缩反应是通过c-Src对钾通道TASK-1的调控来实现的。关键词：肺动脉高压、双孔钾通道TASK-1、c-Src、缺氧性肺血管收缩。Purpose:Toinvestigatetheexactroleofthetwo-poredomainpotassiumchannelTASK-1inthetensionchangeofpulmonaryvascularringcausedbyhypoxia.Toinvestigatethemechanismofthetwo-poredomainpotassiumchannelTASK-1inducedpulmonaryvasoconstrictioncausedbyhypoxia.Methods:Resectedlungtissueswereobtainedfromlungcancerpatientswhounderwentsurgeryandthenthethirdorfourthbranchesofthepulmonaryarterieswereseparatedtomakepulmonaryarteryrings.RM-6000multi-channelpolygraphwasusedtoobservetheimpactonthetensionofvascularringswhichwerepre-incubatedwithc-SrcinhibitorPP2,PP2-likePP3,tyrosinephosphataseinhibitorbpvandTASK-1inhibitora-293(