砷致学习记忆能力损害与海马c-jun bdnf表达变化的关系研究-relationship between arsenic-induced impairment of learning and memory and changes of c - jun bdnf expression in hippocampus.docxVIP

讨论...............................................................36结论...............................................................40参考文献............................................................41·综述·..............................................错误!未定义书签。砷致学习记忆能力损害与海马c-jun、BDNF表达变化的关系研究专业：劳动卫生与环境卫生学研究生：卢秀娟导师：周华芳副教授张华教授摘要目的本研究以大鼠为模型，通过饮水染毒，建立亚慢性砷中毒模型，观察砷暴露对大鼠学习记忆能力影响、对大鼠脑海马c-jun及BDNF表达影响，以探讨砷致学习记忆损害的机制，为砷中毒预防和治疗提供科学依据。方法1，采用40只清洁级SD大鼠（体重：100±20g）,随机分为4组,每组10只，雌雄各半。在清洁级动物房内饲养。以自由饮水方式染毒，染毒组饮亚砷酸钠水溶液，染毒组剂量为：2.4mg/L，12mg/L，60mg/L，对照组饮蒸馏水，每天更换饮用水一次，染毒100天。每周称一次体重。染毒结束前6天，采用Morris水迷宫实验检测大鼠行为学改变。染毒结束后乙醚麻醉，处死大鼠，冰浴断头分离脑组织，-70°冰箱保存。2，指标测定：采用电感耦合等离子体发射光谱法（ICP-AES测定脑总砷含量；Morris检测大鼠空间学习记忆改变；实时荧光定量（qRT-PCR）测定海马c-junmRNA、BDNFmRNA；免疫组化法检测JUN蛋白水平；酶联免疫吸附试验（ELISA）测海马BDNF蛋白含量。3数据处理：数据经Excel双人录入，spss17.0统计分析。结果1，大鼠生长变化：实验期间，染毒组大鼠出现轻微的中毒征表现为脱毛、嗜睡、反应迟钝，高中剂量个别出现脑偏瘫征。各组大鼠在100天染毒期间，体重变化差异无统计学意义（P0.05）。而从大鼠体重变化趋势图可发现，高剂量组大鼠在染毒第7周开始体重较其他组小，体重出现增幅减慢的趋势。2，大鼠脑重系数与脑砷：各组大鼠脑重系数差异无统计学意义（P0.05）。染砷程度不同，染毒组脑砷含量较对照组比较，差异均有统计学意义（P0.05），各组间比较，差异也有统计学意义（P0.05）。3，大鼠学习记忆能力改变：定位航行实验：随染毒剂量增加，空间记忆能力损害加重。与对照组比较，染砷组大鼠逃逸潜伏期延长，从游泳训练第三天结果发现，高剂量组大鼠潜伏期与对照组及低剂量组相比，差异有统计学意义（P0.05），该差异延续到第四天。而低剂量组与中剂量组较对照组，差异没有统计学意义（P0.05）。空间探索实验：随着染砷浓度的增大，各剂量组大鼠在原平台象限停留时间缩短，高剂量组与对照组、低剂量组及中剂量组比较，差异均有统计学意义（P0.05）；在平台象限的游泳距离随剂量增加而减少，其中高剂量组与对照组、低剂量组、中剂量组比较，差异均有统计学意义（P0.05），中剂量组与对照组比较，差异也有统计学意义，而低剂量组较对照组差异无统计学意义（P0.05）；在穿越平台结果中发现，随剂量改变，穿越平台次数依次减少，其中高剂量组与中剂量组较对照组差异有统计学意义（P0.05），低剂量组较对照组，染毒组间两两比较差异无统计学意义（P0.05）。4，脑海马c-jun表达改变：随着剂量增加，脑海马JUN蛋白表达增加，而c-junmRNA表达下调。染毒组JUN蛋白的表达较对照组高，差异有统计学意义（p0.05）各组间多重比较差异均有统计学意义（p0.05）。c-junmRNA的相对表达定量中，高剂量组较对照组表达量相对较低，差异有统计学意义（p0.05）。5，脑海马BDNF表达改变：染毒组BDNF蛋白及其mRNA的相对量表达均低于对照组，差异有统计学意义（P0.05）其中高剂量组和中剂量组BDNF蛋白表达与对照组、低剂量组，差异有统计学意义（P0.05）；高剂量组BDNFmRNA的相对表达量较对照组相对减少，差异有统计学意义（P0.05）。结论1，亚慢性砷暴露可引起学习记忆能力降低。2，长期砷暴露可以诱导JUN蛋白的过度表达，而c-junmRNA表达下调。3，砷暴露，可降低BDNFmRNA及其蛋白表达降低。关键词：砷、海马、Morris水迷宫、学习记忆、c-jun、BDNF实验流程图：建立亚慢性砷中毒模型高剂量组（60mg/L）中剂量组（12mg/L）低剂量组（2.4mg/L）对照组（蒸馏水）亚砷酸钠自由饮水染毒100天检测大鼠空间学习记忆的能力改变（Morris水迷宫实验）定位航行实验空间探索实验乙醚麻醉，处