《血凝的基本知识》ppt课件.ppt

* 1 * 纤维蛋白原含量测定（Fib）－直接法 标准曲线制备 取已知靶值纤维蛋白原参比血浆，用缓冲液稀释成不同浓度，测定各浓度的凝固时间。然后在双对数纸上作图，横坐标为浓度，纵坐标为凝固时间，应为一直线。 样品测定 1/10稀释血浆（1份血浆＋九份缓冲液）测得凝固时间，在曲线上从纵坐标上找出凝固时间，从此点画一平行于横坐标的直线与曲线相交，此交点垂直于横坐标的交点，此即为该样的Fib浓度。 * 1 * 纤维蛋白原含量测定（Fib)--衍算法 PT衍算Fib也称间接法测定Fib(Derived)。具体方法是，对标本进行PT测定的同时，即能得出Fib的含量。测定时不需用Fib的试剂（凝血酶试剂），只用PT试剂。 PT衍算Fib在测定前也需先定标，一般是用Fib含量准确性的质控血浆，用生理盐水进行稀释（如100%,75%，50%，25%）得到不同浓度的Fib的标准系列，再对其进行PT的凝固时间测定及△E（光密度变化）测定，然后把Fib浓度含量降低，其凝固的OD值也会降低，并呈线性相关，以此达到Fib定量的目的。 * 1 * 有关PT衍算Fib 应避免的误解： 误区一：PT衍算Fib是通过PT结果“算”出来的。实际上是依据不同量Fib凝块光密度不同，而测定出来的。 误区二：衍算时PT结果一定与法Fib含量相关。其实有的样本PT正常但Fib可能不正常，或者Fib正常的标本PT有可能不正常。 误区三：PT衍算Fib方法简简便，准确。实际上，超过正常Fib含量的标本，误差很大。 PT衍算法不准确，估算值，国外已淘汰 * 1 * 选择Fib的要点 标准曲线的相关性： r0.995 开平后试剂的稳定型： 长岛液体Fib试剂：37℃，稳定20天以上； 其他国产Fib冻干粉试剂：37 ℃，稳定24小时。 * 1 * Fib检测的注意点 尽量不用衍算法，不准确； 标本中纤维蛋白原含量如超出所用所用试剂的线性范围，必须作适当的稀释后再进行测定，不然对结果影响较大。 当血浆中有肝素或纤维蛋白降解产物（FDP）时，会导致测值偏低。 * 1 * * 1 * Fib检测的结果评估美国CLIA-88提出Fib指标的允许误差 为血凝四项检测中的定量检测； 有国际标准： WHO标准品98/612； 可追溯性 正常值范围：2-4g/L； 美国临床实验室改进修正案 CLIA-88允许误差范围为20%。 Fib 总允许误 （Tea） 靶值 ±15% 精密度（CV％） 批内变异 2 同一天 批间变异 3 天间变异 4 * 1 * 血凝试剂常见的问题 APTT、PT延长及缩短 TT延长 Fib含量过高及过低 * 1 * 标本的原因 抗凝剂与血液比例不对，如大于1：9； 抗凝剂配制错误，如枸橼酸钠含2个结晶水仍按3.8%配制； 抗凝剂应用枸橼酸钠溶液，不能用干燥品，或其他抗凝剂； 抗凝剂与血浆混合时摇匀过于剧烈，使凝血因子被破坏； 血细胞比容积大于55%，抗凝剂比例没变（仍按1:9）； 标本陈旧，超过2小时甚至更长； 口服抗凝药或凝血因子异常； 采血不顺利，有郁滞现象； 标本运输未加盖，致使CO2升高PH升高； 血浆分离应3000rpm，10分钟； 临产妇FBG含量较高，可能会超过正常值； 质控标本2-8℃超过8小时或失效; * 1 * * 1 * 复溶用蒸馏水及材料的原因 复溶蒸馏水质量差； 未用塑料或硅化玻璃管； 实验器材污染； 仪器本身有问题，如灵敏度不够（仪器可用手工操作排除、或凝固终点不对（一般凝固终点在50%有时需根据试剂不同作相应调整到30%甚至20%。 * 1 * 试剂本身的原因 复溶后试剂反复使用。如整瓶复溶好的试剂放入预温槽预温，测试完成后，剩余放回冰箱。反复如此试剂在37℃的时间过长； 复溶后试剂使用时间过长； 试剂储存、运输温度过高，未注意冷藏运输。中间公司未换冰袋； 试剂超过有效期； 购入冒牌试剂； 质控品过期 * 1 * 操作的原因 APTT、PT延长 APTT试剂与标本预温少于3分钟，白陶土最好5分钟； APTT（白）是混浊液，加前未混匀； 实验测试温度（标本、试剂）未预温至36.5-38℃的范围； PT血浆与试剂比例不对； 试剂位误搅拌功能的血凝仪（CA-500）APTT要用鞣化酸； 血凝仪能用半量的最好用半量否则试剂和血浆不易混匀； 枪头和取液器之间要拧紧，不能有空隙。 * 1 * 操作的原因（2） TT延长 血浆与试剂比例不对； 不同类别专用试剂参考正常值不同（DB专用为14-21秒，太平洋为8秒-14秒）；可能出现对应错误； 试剂不应预温而预温时间较长。 * 1 * 操作原因（3） F