细菌性食物中毒的实验室支持泉州ppt课件.ppt

增 菌 培 养 用志贺氏菌增菌液增菌, 41.5 ℃±１℃，16 h～20 h厌氧培养。 智能厌氧微需氧培养系统 （二）分 离 培 养 取增菌后的GN增菌液或志贺氏增菌肉汤分别划线接种于XLD琼脂平板和MAC琼脂平板或RF志贺氏菌显色培养基平板上 于36 ℃?1 ℃培养20 h～24 h，观察各个平板上生长的菌落形态 若出现的菌落不典型或菌落较小不易观察，则继续培养至48 h再进行观察。 初步生化鉴定 从平板上挑取3～4个可疑菌落，接种TSI和葡萄糖半固体培养基各一管，36℃培养18～24h。 初步生化鉴定 TSI生长结果（现象）： 斜面产碱仍为粉红色或红色； 底层产酸不产气，变黄色； 不产硫化氢，不产黑色。 半固体培养基： 沿线生长，无动力。 初步生化鉴定 可弃去地培养物： 在TSI表面呈蔓延生长的。 18～24h内发酵乳糖、庶糖的。 不分解葡萄糖，只在半固体培养基表面生长的。 产气的。 有动力的。 产硫化氢的。 血清学分型（选做项目） 先用四种志贺氏菌多价血清检查，如果呈现凝集，则再用相应各群多价血清分别试验。先用B群福氏志贺氏菌多价血清进行实验，如呈现凝集，再用其群和型因子血清分别检查，福氏志贺氏菌各型和亚型的型抗原和群抗原鉴别见表4。如果B群多价血清不凝集，则用D群宋内氏志贺氏菌血清进行实验，如呈现凝集，则用其Ⅰ相和Ⅱ相血清检查；如果B、D群多价血清都不凝集，则用A群痢疾志贺氏菌多价血清及1～12各型因子血清检查，如果上述三种多价血清都不凝集，可用C群鲍氏志贺氏菌多价检查，并进一步用1～18各型因子血清检查。 志贺氏菌的O抗原 人们原来的认识认为血清学试验是特异性的，但是志贺氏菌的 O抗原和大肠埃希氏菌属关系密切，有半数的菌型与大肠埃希氏菌的某些O抗原完全相同。相同抗原菌属间存在血清交叉凝集反应。因此，生化试验对于属的鉴定是非常重要的。 若生化反应符合，而血清四种多价-，考虑： A、C群志贺菌O抗原外有K包膜抗原遮蔽，煮沸后再凝 可能是EIEC，再做大生化以鉴别 宋内 的R相菌，用R相血清凝集 可能是蜂窝哈夫尼亚菌，做大生化以鉴别 可能是类志贺邻单胞菌，观察动力、氧化酶 报告方式 痢疾志贺菌1型 福氏志贺菌2a型 福氏志贺菌X变种 鲍氏志贺菌13型 宋内志贺菌S相 福建省福氏志贺菌优势血清型别 2005首次检出福氏志贺菌4c血清亚型（F4c），在随后的分离株中F4c亚型成为福建省福氏志贺菌分离株的优势血清型17/40(42.5%) 继往流行的福氏2a、1b 血清亚型分离的菌株数却减少 说明福建省福氏志贺菌优势血清型别在发生更替 。 金黄色葡萄球菌 金葡菌食物中毒主要特征 来源：主要存在于人们的皮肤、鼻、喉、耳等部位。进食了被污染的肉类、乳品、定粉制品。 症状：恶心、呕吐（频繁而剧烈），腹痛、腹泻，由于剧烈呕吐和腹泻，可引起大量失水而发生外周循环衰竭和虚脱。 潜伏期：一般30min～6h，最短为15min左右，很少有超过8h的。 金黄色葡萄球菌检验流程 食物25g+生理盐水225mL，取5mL 50mL7.5％NaCl肉汤 血平板、B-P平板36℃24h 染色镜检 血浆凝固酶实验 观察菌落形态 报告 呕吐物、粪便 肛拭了、涂抹拭子 3个连续稀释度接种B-P平板36℃48h 10mL7.5％NaCl肉汤 BHI肉汤和营养琼脂斜面 金黄色葡萄球菌菌落形态 B-P琼脂：菌落圆形、凸起、湿润，直径2～3mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明圈，接种针接触菌落有似奶油至树胶样硬度，偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落，但无混浊带及透明圈。长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙并干燥。 血平板：形成较菌落较大，圆形、光滑凸起、湿润、金黄色（有时为白色），菌落周围可见完全透明溶血圈。 BP平板： 胰蛋白胨、牛肉膏和酵母膏提供碳源、氮源、硫、维生素和痕量矿物元素 丙酮酸钠是一种生长促进剂 亚碲酸盐对除金黄色葡萄球外的其他能分解卵黄的菌株有毒性，并使菌落产生黑色 卵黄提供营养和有利于观察卵磷脂环 甘氨酸和氯化锂对金黄色葡萄球菌以外的其它菌株有抑制作用。 金黄色葡萄球菌菌落形态 检验结果的判定原则（1） 多数患者样品中检出的致病意义明确的细菌在种类、生化和/或血清型、毒素型均一致时，可报告为细菌性食物中毒的病原体 检验结果的判定原则（2） 非病源检样与病源检样检出占绝对优势但通常致病意义不甚明确的细菌如大肠艾希菌、溶藻弧菌等，且其在种类、生化和/或血清型均一致，同时本次细菌性食物中毒事件中非患者对照标本中未检出该菌时，应做该菌的毒素、毒素基因或动物试验，阳性结果可报告为细菌性食源性疾病事