体外抗菌药物抑菌试验.ppt

体外抗菌药物抑菌试验（亦称细菌对药物的敏感试验-简称药敏试验）;一、概念;药物敏感试验是在体外检测抗菌药物对细菌的抑制和杀灭的作用。根据药物的常规剂量在体内所能达到的浓度对细菌的影响，将被检菌株对该药的敏感程度分为三级：敏感、中度敏感／中介度、耐药。 ;敏感(S)：表示细菌可被常规剂量的药物在体内达到的浓度所抑制或杀灭。 中度敏感(MS)：表示细菌可被该药物大剂量的浓度所抑制或在药物生理性浓集的部位被抑制。 只有少数药物可报告中度敏感，如氨苄青霉素测肠球菌。 中介度(1)：是为防止因技术因素失控导致结果误差而设置的“缓冲域”因其临床意义难以确定，故不应向临床医师报告。而应重做稀释法根据MIC结果做出判断。 耐药(R)：表示细菌不能被常规剂量的药物所达到的浓度所抑制。;药物在体外稀释的不同浓度对细菌生长的影响，可分为二种：;近年来，广谱和超广谱抗菌药物的应用及滥用，造成耐药菌株数迅速增加，耐药范围不断扩大，导致抗菌治疗效果严重下降，耐药菌引起的内源性感染和医院交叉感染已成为全球性的突出问题。如何指导科学合理地抗菌治疗及耐药监测已成为微生物实验室及临床微生物实验室的重要任务之一。体外检测抗菌药物对细菌的敏感试验作为实验室的主要手段，在临床医学中有着重要的作用。;二、 药敏试验的常用方法;K-B纸片扩散法、肉汤稀释法、琼脂稀释法及 E-test法试验 前面讲过药物对同一菌株，MIC值越小，其抗菌力就越强， K-B法的抑菌圈(环) 就越大，细菌对这种药物就越敏感，这是K-B 纸片扩散法与稀释法的关系，呈负相关。 ;（一） K-B纸片扩散法;原理 是将定量抗菌药物纸片贴在涂有细菌的琼脂平板上，抗菌药物在琼脂内向四周扩散，其浓度逐渐递减，使纸片周围的敏感细菌受到抑制生长，形成抑菌圈，测量抑菌圈的直径来判定细菌对药物的敏感程度。此法简单易行、价格便宜、药物选择灵活，适用对生长快的细菌进行药敏试验。 ; 1 水解酪蛋白琼脂（Mueller-Hinton AgarMHA） 倾注成4mm厚的12～15cm平板，将其保存于4℃冰箱可用1周。 2硫酸钡比浊管 1.175%氯化钡（BaCl2 .2H2O）0.5ml加0.36N(1%)流酸溶液99.5ml,充分混匀，每管4ml其浊度相当于0.5麦氏（McFarland standard）比浊管第一管1/2（1.5亿/ml相当于1.5×108CFU／m1）,使用期半年。;3 抗菌素纸片 现有商品（阿米卡星(AMK)、庆大霉素(GEN)、青霉素(PEN)、苯唑西林(OXA)、氨苄西林(AMP)、氨苄西林／舒巴坦(AMS)、呢拉西林(PIP)、头抱唑林(FZN)、头孢呋辛(FRX)、头孢他啶(CAZ)、氨曲南(ATM)、亚胺配南(1MP)、环丙沙星(CIP)、万古霉素(VAN)、克林霉素(CLI)、复方新诺明(SXT) ;4 质控菌 金黄色葡萄球菌（ATCC25923）、大肠埃希菌（ATCC25922） 5 其它 无菌生理盐水、无菌棉拭、镊子、游标毫微米卡尺、消毒小试管、1ml 、10ml 吸管。 ;操作方法;;平板在室温下干燥3～5min后。根据试验菌株选择抗菌谱。如阳性球菌:金黄色葡萄球菌选择青霉素(PEN)、苯唑西林(OXA) 环丙沙星(CIP)、万古霉素(VAN)、克林霉素(CLI)等。大肠埃希菌选用氨苄西林(AMP)、头抱唑林(FZN)、庆大霉素(GEN)、环丙沙星(CIP)、亚胺配南(IMP)等。 用无菌镊子将含药纸片，紧贴于琼脂表面，各纸片之间相距应大于24mm，纸片距平板内缘应大于15mm，置37℃孵育18h～24h观看结果。 ;结果;;注意事项;（二）肉汤稀释法 及琼脂稀释法 ;优缺点;材料（肉汤稀释法）;操作方法 ;常用的原液浓度 肉汤稀释法为1280u（μg）/ml，琼脂稀释法为5120u（ μg）/ml。具体的还应根据某药的抑菌特性而定。最好用灭菌溶剂配制。如需要，原液配制好后用过滤法除菌，小量分装备用。大部分抗菌药物原液在-20℃以下可保存3个月，但在4℃下只能保存1周。 ;测定浓度稀释（参照下表） ;测定浓度稀释文字说明;测定方法; 每管加菌液50μl（含菌量达到105 CFU／m1）测试菌和质控标准菌的准备：增菌培养同K-B法，4～6小时幼龄菌用3～5m1生理盐水校正浓度至0.5麦氏比浊标准。再用MH肉汤1:100稀释。加完后，轻摇，置37℃孵育18～24 h观察结果。 ; 微量法MIC：同试管法，各管中抗菌药物的终浓度依次为128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25、0.12、0.06、0.03u/ml。各浓度取200微升加入消毒的微量反应板内，以无药物MH肉汤为空白对照及生长对照。以另一排