河豚毒素研究及其免疫研究课件.pptxVIP

河豚毒素研究及 免疫应用 国家战略忽悠局 YN-ZH1604号文件 延时文字，不要可以删除 1 目录页 延时文字，不要可以删除 参考文献 概述 PART 01 1 河豚 河豚毒素 延时文字，不要可以删除 河豚 puffer fishes PROFILE 河豚介绍 河鲀，为硬骨鱼纲鲀科鱼类的统称，俗称河豚。自古以来中国食用的河豚皆生息于河中，因捕获出水时发出类似猪叫声的唧唧声而得名河“豚”。另有“气泡鱼”、“吹肚鱼”、“河豚鱼””、“气鼓鱼”、“乖鱼，鸡泡” 等称呼。古时称“肺鱼”。 河鲀为暖温带及热带近海底层鱼类，栖息于海洋的中、下层，有少数种类进入淡水江河中，当遇到外来危险时使整个身体呈球状浮上水面，同时皮肤上的小刺竖起，借以自卫。常见的有红鳍东方鲀、暗纹东方鲀（T.fasciatus）、黑鳃兔鲀、凹鼻鲀、黑斑叉鼻鲀等 延时文字，不要可以删除 河豚毒素 性质 白色结晶，无味 微溶于水，不溶于有机酸剂 对酸作用稳定，没有确定熔点 延时文字，不要可以删除 氨基全氢喹唑啉型化合物 分子式：C11H17O8N3 分子量：319 河豚毒素 毒性 是自然界中所发现的毒性最大的神经毒素之一，其毒性比氰化物还要高1250多倍，0.5mg即可致人于死命。毒素对肠道有局部刺激作用，吸收后迅速作用于神经末梢和神经中枢。 雌性雄性 冬春夏秋 卵巢脾脏肝脏血液眼睛鳃耙皮肤精巢 一般肌肉中不含有河鲀毒素，但河鲀死后内脏中的毒素可渗入肌肉，此时鱼肉也含有少量毒素。河鲀毒素化学性质和热性质均很稳定，盐腌或日晒等一般烹调手段均不能将其破坏，只有在高温加热30min以上或在碱性条件下才能被分解。 延时文字，不要可以删除 中毒症状 肠胃症状 恶心、呕吐、腹痛或腹泻 神经麻痹症状 口唇。舌尖、指端麻木→全身麻木，眼睑下唇，四肢无力，肌肉软瘫 呼吸、循环衰竭症状 呼吸困难、血压下降、瞳孔异常、言语障碍、昏迷→呼吸衰竭 延时文字，不要可以删除 作用机理 研究表明，TTX 属小分子非蛋白类成分神经毒素，服用后首先迅速由胃肠道吸收，然后进入血液中，迅速抑制中枢神经和末梢神经系统，引发神经传导阻滞，造成神经麻痹，严重的会引发脑干神经麻痹导致呼吸循环衰竭而死亡，具有潜伏期短、死亡率高的特点。 深入药理研究表明，TTX 也是一种电压敏感的钠通道外口特异性阻滞剂，在较低浓度下就能通过与细胞膜上受体结合，再通过关闭机制使钠离子通道h闸门关闭，即选择性抑制钠离子通过神经细胞膜而允许钾离子、氯离子通过，具有高度专一性，使细胞膜失去可极化状态，从而抑制甚至阻断了神经-肌肉的兴奋与传导过程，导致神经肌肉活动障碍，严重者可发生麻痹状态并可引起呼吸中枢麻痹、血压下降、脉搏迟缓，最终可能因呼吸停止和循环衰竭而死亡。 生物活性 TTX 是一种电压敏感的 Na+通道外口特异性阻滞剂，其麻醉作用是普鲁卡因的 4 000 倍，可代替吗啡、杜冷丁起镇痛作用，且不成瘾，并有解痉、降压、抗心律失常等作用。在医学方面，TTX 通过阻断快速钠离子通道来治疗某些心律失常具有潜在可能性。最新研究表明 TTX 是神经生理学、肌肉生理学和钠离子通道药理学研究的非常有用的工具。已经证明 TTX可有效治疗某些疾病如癌症晚期造成的疼痛等。虽然 TTX 是重要的选择性钠离子通道抑制剂，然而最近的研究表明，TTX 也表现出对犬类心脏细胞L 型钙离子通道的阻断作用。 适应性进化 在对河豚毒素没有免疫力的生物体内，钠通道的 α-亚基上存在河豚毒素的受体，河豚毒素与 α-亚基门孔附近的氨基酸残基结合，阻止钠离子进入细胞内，引起河豚毒素中毒。而河豚体内细胞的构造与其他生物不同，河豚体内还存在可以和河豚毒素结合的蛋白质，从而使河豚对体内的河豚毒素具有免疫力。比较红鳍东方鲀、黑青斑东方鲀 和斑马鱼的基因序列图谱，发现红鳍东方鲀和黑青斑东方鲀骨骼肌的 Nav1.4通道发生了变异，正是这种变异使河豚具有抵抗河豚毒素的能力。红鳍东方鲀和豹纹东方鲀的变异类似，都是在 Na v 1.4 通道的 401 位点上发生了取代，取代为一个折叠程度更高的不饱和氨基酸，河豚的这些氨基酸是不与河豚毒素结合的，从而也就不能对河豚的钠通道造成影响。 适应性进化 通过克隆调控豹纹东方骨骼肌 Na v 1.4 通道表达的 cDNA，发现 Nav1.4通道区域Ⅰ401位点处存在一个不饱和氨基酸，即天冬酰胺。通过基因工程把不饱和氨基酸移植到对河豚毒素敏感的小鼠骨骼肌 Na v 1.4 通道处，移植的不饱和氨基酸的折叠程度越高，小鼠抵抗河豚毒素的能力越强。当不饱和氨基酸的折叠程度大于取代位点氨基酸折叠程度的2500倍时IC50(50%Na+通道发生阻断时河豚毒素的浓度)提高至47µmol/L。河豚对河豚毒素具有免疫力是基因变