生防细菌的农药降解特性及其降解机制的分析-analysis of pesticide degradation characteristics and mechanism of biocontrol bacteria.docxVIP

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生防细菌的农药降解特性及其降解机制的分析-analysis of pesticide degradation characteristics and mechanism of biocontrol bacteria

独 创 声 明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得 的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包 含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得 (注:如没有其他需要特别声明的,本栏可空)或其他教育机构的学位或证书 使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作 了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名: 导师签字: 学 位 论 文 版 权 使 用 授 权 书 本学位论文作者完全了解 山东师 范大 学 有关保留、使用学位论文的规定, 有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅 和借阅。本人授权 山 东 师 范 大 学 可以将学位论文的全部或部分内容编入有关 数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 (保密的学位论文在解密后适用本授权书) 学位论文作者签名: 导师签字: 签字日期:2010 年 月 日 签字日期:2010 年 月 日 山东师范大学硕士学位论文 山东师范大学硕士学位论文 山东师范大学硕士学位论文 山东师范大学硕士学位论文 目 录 中文摘要 1 Abstract 3 第一章 文献综述 5 1 拮抗细菌在植物病害生物防治中的应用概况 5 1.1 目前拮抗细菌应用的主要种类 6 芽孢杆菌(Bacillus spp.) 6 假单胞杆菌(Pseudomonas spp.) 6 土壤放射杆菌(Agrobacterium radiobacter) 7 类芽孢杆菌(Paenibacillus spp.) 7 1.2 拮抗细菌的抑菌机制和抑菌结果 7 1.2.1 拮抗作用 7 1.2.2 竞争作用 8 1.2.3 寄生作用 8 1.2.4 诱导系统抗性(ISR) 8 1.3 拮抗细菌生防作用的发展趋势和研究展望 9 2 微生物应用于生物修复的研究进展 10 2.1 常用 3 种农药的危害和研究现状 11 2.1.1 拟除虫菊酯类农药的危害及研究现状 11 2.1.2 有机磷农药的危害及研究现状 12 2.1.3 烟碱类农药的危害及研究现状 13 2.2 农药残留微生物降解的研究现状 14 2.2.1 可降解农药的微生物菌株的筛选 14 2.2.2 农药降解菌的获得途径与鉴定 14 2.3 农药微生物降解能力的测定 15 2.3.1 分光光度法 16 2.3.2 气相色谱法(GC) 16 2.3.3 高效液相色谱法(HPLC) 16 2.3.4 气相色谱法一质谱联用技术(GC-MC) 17 2.4 农药微生物中降解酶的研究 17 3 本研究的立题依据、研究内容及技术路线 18 3.1 立题依据 18 3.2 研究内容 20 3.3 技术路线 20 第二章 生防细菌的分离、筛选及鉴定 21 1 材料与方法 21 1.1 实验材料 21 1.1.1 土样 21 1.1.2 病原真菌 21 I PAGE PAGE IV 1.1.3 培养基 21 1.1.4 主要仪器和试剂 22 1.2 实验方法23 1.2.1 土壤细菌的分离 23 1.2.2 拮抗性检测 23 1.2.3 菌种形态和生理生化鉴定 24 1.2.4 菌种分子生物学鉴定 24 2 结果与分析 25 2.1 拮抗细菌的分离筛选25 2.2 菌株菌落形态和生理生化鉴定27 2.2.1 菌落形态 27 2.2.2 个体形态 27 2.2.3 生理生化特征 28 2.3 菌株的分子鉴定29 2.3.1 菌株总 DNA 的提取 29 2.3.2 菌株 16S rDNA 序列的克隆 29 3 讨论 33 3.1 广谱生防细菌的筛选33 3.2 细菌鉴定33 3.3 生防细菌研究现状34 第三章 生防细菌的拮抗机制及其盆栽促生效果 35 1 材料与方法 35 1.1 实验材料35 1.1.1 菌株 35 1.1.2 培养基 35 1.1.3 主要仪器和试剂 36 1.2 实验方法36 1.2.1 发酵液对病原真菌的抑制实验 36 1.2.2 发酵液对病原菌菌丝的影响 37 1.2.3 发酵液粗蛋白对病原真菌的抑制实验 37 1.2.4 胞外酶活力测定 37 1.2.5 菌株 H10 对黄瓜的盆栽促生效果 39 2 结果与讨论 40 2.1 发酵液对病原真菌的抑制实验40 2.1.1 发酵液对病原真菌的抑制试验结果 40 2.1.2 发酵液对病原真菌菌丝的作用 40 2.1.3 粗蛋白质沉淀对病原菌的抑制实验结果 41 2.2 酶活力测定实验结果42 2.2.1 胞外蛋白酶活力 42 2.2.2 几丁质酶

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