生长追赶iugr大鼠骨骼肌pgc-1α的dna甲基化和基因表达-dna methylation and gene expression of pgc - 1α in skeletal muscle of iugr rats.docxVIP

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2018-08-01 发布于上海
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生长追赶iugr大鼠骨骼肌pgc-1α的dna甲基化和基因表达-dna methylation and gene expression of pgc - 1α in skeletal muscle of iugr rats

目录摘要1Abstract3正文5引言5材料和方法9结果32讨论39参考文献43综述：PGC-1α的作用和调控机制及其与胰岛素抵抗的关系50参考文献61英文缩略词表70致谢71生长追赶IUGR大鼠骨骼肌PGC-1α的DNA甲基化和基因表达摘要背景和目的：宫内发育迟缓(intrauterinegrowthretardation,IUGR)尤其是伴随生后出现生长追赶（catch-upgrowthIUGR,CG-IUGR）的个体易发生胰岛素抵抗，而过氧化物酶增殖物激活受体γ（PPARγ）的共激活因子-1α（PGC-1α）是营养和能量代谢的关键调控点，我们推测CG-IUGR大鼠骨骼肌中PGC-1α启动子的DNA甲基化及PGC-1α基因的表达水平可能发生了改变并在生长追赶及胰岛素抵抗发生机制中起着重要作用。方法：将SPF级别的受孕第一天的SD雌鼠随机分为正常饮食组和限食组，对限食组母鼠孕期全程限制饲料（约相当于母鼠孕期正常食量的30%）并减少每窝仔鼠数量以建立CG-IUGR模型。于大鼠8周龄时处死并取其后肢骨骼肌，提取RNA、蛋白及DNA。用实时荧光定量PCR（realtimePCR）和免疫印迹（westernblot）法检测PGC-1α的mRNA及蛋白表达水平；对DNA进行亚硫酸氢盐转化，将转化后的模板用于PCR扩增PGC-1α启动子序列，用焦磷酸测序（pyrosequencing）的方法分析PGC-1α启动子上-803、-787、-582、-326、-215、-186及-178位点的甲基化水平。结果：8周龄的CG-IUGR大鼠骨骼肌组织中PGC-1α在mRNA和蛋白水平上均小于正常组(p＜0.05)，PGC-1α启动子上-803位点和-787位点的甲基化水平高于对照组（p＜0.01）。大鼠体质指数（BMI）和PGC-1α启动子上-803位点（r=0.803）及-787位点（r=0.836）的甲基化水平呈正相关（p＜0.01），BMI和PGC-1α的mRNA水平呈负相关（r=-0.764,p＜0.05）。但PGC-1α的mRNA水平和PGC-1α启动子的-803位点和-787位点的甲基化水平无直线相关关系（p0.05）。结论：CG-IUGR大鼠骨骼肌PGC-1α启动子特异位点甲基化水平及PGC-1α表达量发生了改变，并均与BMI线性相关，宫内营养不良的环境（IUGR）及生后的营养充足的环境（生长追赶）可能共同介导了这种改变，这可能是编程CG-IUGR胰岛素抵抗表型的机制之一。关键词：宫内发育迟缓；生长追赶；PGC-1α；DNA甲基化；骨骼肌；胰岛素抵抗DNAmethylationandgeneexpressionofPGC-1αlphainskeletalmuscleofIUGRratswithcatch-upgrowthABSTRACTBackgroundandObjective:Catch-upgrowthIUGR(CG-IUGR)individualispronetoinsulinresistance.Peroxisomeproliferator-activatedreceptorgamma(PPARgamma)coactivator-1alpha(PGC-1alpha)isahubofnutritionandenergymetabolism.WehypothesizethattheDNAmethylationandgeneexpressionofPGC-1alphainskeletalmuscleplayaroleinthemechanismofinsulinresistanceofCG-IUGRrats.Methods:ACG-IUGRratmodelwasestablishedthroughmaternalnutritionalrestrictionandreductionoflittersizefrompostnatalday1.The8-weekratsweresacrificedforhind-limbskeletalmusletissue,andtheRNA,proteinandDNAwereextracted.RealtimequantitativePCRandwesternblotwereusedtodeterminetheexpressionlevelofPGC-1α；Afterbisulfitetreated,DNAwasusedinPCRtoamplifythesequenceofPGC-1αpromoter,themethylationlevelofthespecifiCpGsitesinPGC-1alphapromoterwereanalyzedbypyrosequencing.Results:CG-