色谱峰的正态分布.PPT

当塔板数n较少时，组分在柱内达分配平衡的次数较少，流出曲线呈不对称峰形。 组分在柱 出口的 质量分数 3、色谱峰的正态分布（N 50）→近似对称分布 讨论 Cmax即流出曲线的峰高 C：任意时间t时组分在柱出口处的浓度 C0：峰面积，某组分的总量 4、理论板数和理论塔板高度的计算 理论塔板高度H：为使组分在柱内两相间达到 一次分配平衡所需要的柱长。 理论塔板数n：组分流过色谱柱时，在两相间 进行平衡分配的总次数。 neff/n理 = (tR’/tR)2 = {tR’/[tM(1+k)]}2 = [k/(1+k)]2 小结 1）塔板理论的贡献：从热力学角度 解释了色谱流出曲线的形状和浓度极大点的位置 阐明了保留值与K的关系 提出了评价柱效高低的n和H的计算式 2） 在比较相似柱的柱效时有用 须在给定条件，指定组分测定时才有意义 例1：在柱长为2m的5%的阿皮松柱、柱温为100oC，记录纸速度为2.0cm/min的色谱条件下，测定苯的保留时间为1.5min，半峰宽为0.20cm，求理论塔板数和理论塔板高度。 解： 5、塔板理论优缺点 成功处： 解释了色谱流出曲线的形状和浓度极大值对应的tR 阐明了保留值与K的关系 评价柱效（n、H） 存在问题: 1）做出了四个与实际不相符的假设，忽略了组分在两相中传质和扩散的动力学过程 2）只定性给出塔板高度的概念，却无法解释影响板高的因素 3）排除了一个重要参数——流动相的线速度u， 因而无法解释柱效与流速之间的关系 更无法提出降低板高的途径 1956年荷兰学者 Van Deemter 等人在研究气液色谱时提出了速率理论，在塔板理论的基础上引入了影响板高的动力学因素，将色谱过程与柱内组分的分子运动联系起来，认为影响板高的因素有三，并建立了速率方程（范第姆特方程）。 速率方程 H = A + B/u + Cu 二、 速率理论 速率理论 阐明影响柱效（色谱峰扩展）的因素 H = A + B/u + Cu A：涡流扩散 （eddy diffusion）系数也叫多径扩散系数 B：纵向扩散（longitudinal diffusion）系数 C：传质阻抗 （mass transfer resistance）系数 u：载气线速度 塔板高度—流速曲线 由速率方程及上图可看到流速对柱效的影响： 1）当u小时，B/u 项大，Cu 项小； 2）当u大时，B/u项小，Cu项大； 3）Hmin=A + 2(B.C)1/2 4）最佳载气速度：uopt = (B/C)1/2 对于一根100cm长的柱来说，其最佳流量在5～50 mL/min，或每小时0.3～3倍的柱体积。 1、涡流扩散项（多径扩散项）：A 产生原因：载气携样品进柱，遇到来自固定相颗粒的阻力 → 不断改变流向，路径长短不一 →涡流扩散 影响因素：固体颗粒越小，填充越实，A项越小 注：颗粒太小，柱压过高 填充柱：60~100目 空心毛细管柱（0.2~0.5mm），A=0，n理 较高 对于填充柱，填充均匀性与柱径大小有关，2—5mm最均匀 讨论： 2、纵向扩散项（分子扩散项）：B/u 产生原因： 组分在固定相中被流动相推动向前、展开 →前后存在浓度差 r 影响因素： 讨论： 注：为了减小纵向扩散，宜选用分子量较大的载气、较高线速度和较低柱温 选择载气原则：兼顾分析时间和减小纵向扩散 u 较小时，选M 较大的N2气（粘度大） u 较大时，选M 较小的H2气，He 气（粘度小） 3、 传质阻抗项：C·u 产生原因：样品在气液两相分配，样品未及分配平衡就被载气带走，有的则滞后，而造成峰扩张 影响因素： 固定液应完全覆盖载体表面，不可以太薄，否则柱子寿命短，k太小；T不可以超过固定液最佳使用温度 采用比表面积较大的载体来降低液膜厚度 小结：范氏方程说明了在色谱分离条件的选择中，以下各因素对柱效和峰宽的影响。 （1）填充物填充均匀程度、粒度； （2）载气种类及流速； （3）色谱柱温度 （4）固定相的液膜厚度 （5）柱直径 1、流动相流速对HPLC板高的影响（与GC对比） 三、液相色谱中的速率理论 速率理论也适用于液相色谱。只是由于液相色谱中以液体代替气相色谱中的气体作流动相，使速率方程式中的纵向扩散项（分子扩散项）对H值的影响与气相色谱不同，可以忽略。 2、涡流扩散项（多径扩散项）：A 影响因素： dp：降低dp，采用小粒度固定相，常用3-5?m。 ?：降低?，球形、粒度均匀的固定相。 使用小而均匀的填充颗粒能改善柱效 讨论： 3、传质阻抗项 H = A + Cu = A + Cmu + Csm