文档狂犬病抗体检测定稿ppt课件.pptVIP

用于狂犬病病原学检测的脑标本的采集 狂犬病实验室诊断常常需要采集脑组织标本。为了诊断的准确性，采集的标本在运抵实验室的过程中必需很好的保存。这要求动物的头或脑组织标本必需迅速制冷，并在运输过程中保持冷藏。到达实验室后，打开动物头骨，取出脑标本，用不同的诊断方法进行检测。 枕骨大孔插入 眼角插入 狂犬病脑组织标本的采集 经上眼窝用抽吸式采样针采集样品 脑样品采集 脑标本的保存和运输 运输过程应将标本放入带冰排或干冰的冷藏包 中进行。 将标本放入15ml离心管并对标本进行编号； 将编好号的离心管放入带冰排的冷藏包中储存； 标本采集完成后尽快放入－20℃或－70℃冰箱 进行保存； 美国自发性脑出血处理指南课件慢性鼻炎吃什么药好慢性鼻窦炎吃什中医中药治疗高血脂饮食保健资料子宫肌瘤合并胆囊炎围手术期护理中医药对冠心病稳定性心绞痛长期治疗价值 慢性单纯性苔藓痤疮白癜风教材课程 美国自发性脑出血处理指南课件慢性鼻炎吃什么药好慢性鼻窦炎吃什中医中药治疗高血脂饮食保健资料子宫肌瘤合并胆囊炎围手术期护理中医药对冠心病稳定性心绞痛长期治疗价值 慢性单纯性苔藓痤疮白癜风教材课程 狂犬病血清学检测 血清学检测 血清学包括检测和评估血液／血清中的免疫成分 血清或脑脊液中狂犬病特异性抗体的存在表明曾经有狂犬病抗原的暴露 狂犬病特异性抗体的测定还可用于评估免疫后的个体体液免疫水平和狂犬病人的诊断目的。 如何选择检测方法 保护狂犬病感染依赖于狂犬病中和抗体的存在。因此，检测和定量狂犬病中和抗体的方法，如小鼠中和试验﹑快速荧光灶抑制试验（RFFIT）﹑荧光抗体病毒中和试验（fluorescent antibody virus neutralization test）成为被推荐的用于狂犬病血清中和抗体定量检测方法。 敏感﹑特异﹑精确度的要求应该成为选择试验方法首先考虑因素. 实验室材料﹑仪器和安全设备也必须考虑。 选择适合检测狂犬病抗体的试验时，准确地理解涉及到抗体反应时将测定哪一种成分. 狂犬病免疫反应 免疫反应的特异性是由用于产生抗体的狂犬病毒上存在的独特抗原决定簇所决定。完整的狂犬病毒诱发的抗体形成有可能抵抗病毒所有的蛋白，但主要抗狂犬病毒糖蛋白和核蛋白。 研究能够中和狂犬病毒的单克隆抗体表明这些单克隆抗体直接抗狂犬病毒糖蛋白(G)数个表位。与狂犬病毒中和有关的机制要求至少每个G抗体分子诱发病毒-受体结合活性的位阻现象以及包括G蛋白构象变化最终导致病毒-受体结合能力丧失。 暴露于狂犬病毒抗原后的个体诱发的体液免疫反应包括多种多克隆抗体，这些多克隆抗体共同影响多种复杂的中和机制。 狂犬病抗体检测意义 狂犬病血清学检测常规用于人和动物狂犬病疫苗免疫后免疫反应的确定和评估初次免疫后常规加强免疫时间；此外也用于人狂犬病的诊断；评价新的狂犬病疫苗和新的免疫程序。 狂犬病血清学检测在国际上犬和猫进入无狂犬病国家时用于鉴定。可靠的血清学中和抗体检测阳性﹑疫苗接种﹑其他有关文件成为合格检疫过关的要求。 目前，世界上大多数无狂犬病地区对于健康犬或猫输入进所属国家的海关检疫越来越依赖于合格的实验室狂犬病血清学检测。 狂犬病抗体检测意义 在最后的分析当中，狂犬病血清学检测在一个设计良好的狂犬病预防项目中起者一个重要的作用，包括新型狂犬病疫苗的注册和获准，监测人的免疫状况，动物疫苗大规模免疫，狂犬病的监测和流行病学，以及维持无狂犬病地域。 因此，选择正确的血清学方法以保证检测步骤的质量控制以及标准化是必备的前提。 狂犬病中和实验 世界上应用的测定狂犬病毒中和抗体存在的血清学方法绝大多数是病毒中和实验。虽然也有其他免疫机制保护抵抗临床狂犬病的发展，狂犬病毒中和抗体是与保护密切相关的。因此，小鼠中和实验或细胞中和实验是被认为是人接种疫苗或感染狂犬病毒后抗狂犬病中和抗体反应最为相象的实验。 有多种不同的狂犬病毒中和实验，但所有这些实验的基本步骤是一致的，包括系列稀释的热灭活血清与标定好含量的活狂犬病毒在37℃下作用60～90分钟；测定接种到活动物或培养细胞中的残留的病毒活性，并分别根据发生死亡的比例或检测到的感染细胞的数量计算抗体的滴度。 常用狂犬病中和实验方法 传统的小鼠中和实验是1935年发展的，最初被作为金标准。 RFFIT是1973年建立的，荧光抗体病毒中和试验是1997年发展起来的，是目前WHO推荐的唯一两种体外中和实验方法，也因此被广泛应用。 RFFIT方法是在多孔板上进行，血清在每一个板孔中五倍系列稀释。RFFIT方法的演变包括使用在载玻片上的微孔板和两或三倍系列稀释血清。滴定好的狂犬病攻击病毒，加在稀释后的血清中，然后在37℃下孵育，将BHK或MNA细胞加在每一孔中。37℃，5% CO2 孵育20～24小时，也有延长至48小时的。