五 DNA制备、鉴定与含量测定.pptVIP

DNA的提取、鉴定及含量测定 1.初步掌握从生物组织中分离DNA的方法， 进一步了解DNA的物理化学性质。 2.掌握DNA纯度鉴定的原理和方法。 以NaCl 溶液为例：在稀NaCl（0.14mol/L）溶液中，RNP中溶解度很大，而DNP在其中的溶解度很小。当NaCl浓度逐渐增大时，RNP的溶解度变化不大，而DNP 的溶解则随之不断增加。当NaCl浓度大于1mol/L 时，DNP的溶解度最大，因此通常可用1.4mol/L NaCl提取DNA。将RNP与DNP分开。 分离得到核蛋白后，需进一步将蛋白质等杂质除去，常用的去除蛋白质的方法有3种： ①用含异戊醇的氯仿振荡核蛋白溶液，使其乳化，然后离心除去变形蛋白，此时蛋白质凝胶停留在水相和氯仿相中间，而DNA溶于上层水相。用两倍体积95%乙醇溶液将DNA钠盐沉淀出来。如果用酸性乙醇或冰乙酸来沉淀，得到的是游离的DNA。②用SDS等去污剂使蛋白质变性，与核酸分离，从而从材料中直接提取出DNA。 ③用苯酚处理，然后离心分层，DNA或溶于上层水相，或存在于中间残留物中，变性蛋白则停留在分层内。吸出上面水相，将其注入两倍体积的95%乙醇溶液中，得到白色纤维状DNA沉淀。反复使用上述方法多次处理DNA核蛋白溶液，就能将蛋白等杂质较彻底地除去，得到较纯的DNA制品。为了彻底除去DNA制品中混杂的RNA，可用 RNase 处理。生