实时荧光pcr技术检测奶制品掺假方法分析-analysis of real-time fluorescence pcr for detection of adulteration in dairy products.docxVIP

I I 实时荧光  PCR 技术检测奶制品掺假方法研究 中文摘要 中文摘要 【目的】运用实时荧光 PCR 技术建立奶制品中主成分牛、羊及其常见掺假成 分谷类、大米、大豆源性成分的定性检测体系，以鉴别检测奶制品相关掺假；并 在定性的基础上探索奶粉中牛源性主成分的定量检测方法。 【方法】 .奶制品掺假定性检测体系研究：分别以牛的线粒体细胞色素 b 基因、羊的 线粒体 12SrRNA 基因为靶基因设计合成牛、羊源性引物探针，以常见掺加物大米、 玉米、小麦、高粱、大麦等谷物的叶绿体 rbcL 基因作为靶基因通过 BLAST 软件 比对选择其同源保守区域设计合成谷类通用性引物探针、以水稻的根部表达基因 (gos9)设计合成大米特异性引物探针、以大豆凝集素基因（lectin）为靶基因设计 合成大豆特异性引物探针，建立奶类掺假实时荧光 PCR 检测体系。经对目标成分 与奶制品中常添加的非目标成分检测以验证其通用性和特异性，用 10 倍倍比稀释 的目标成分的 DNA 模板检验其灵敏度，以自制模拟奶类样品检测其在模拟样品 检测中的灵敏度及抗干扰能力，并进一步经市售奶类样品检测验证其应用检测能 力。 .奶粉中牛源性主成分定量研究：采用实时荧光 PCR 技术以牛的线粒体细胞 色素 b 基因为靶基因建立不同质量百分比的牛奶粉标准品中的主成分含量与相应 Ct 值间的定量标准曲线方程，利用标准曲线计算出奶粉中主成分的质量分数。经 回收率实验对该方法的准确性进行评估，并将其用于市售婴幼儿奶粉样品的检测 以验证其可行性。 【结果】 1.奶制品掺假定性检测体系研究：（1）所建立的牛、羊源性主成分定性检测 体系在 35 个循环之内只有目标成分出现阳性扩增，而与其他非目标成分均无交叉 扩增，特异性好。灵敏度分别为 0.1ng、0.01ng 的模板 DNA，1%（w/w)、0.5%（w/w) 的模拟样品。进一步经市售样品检测验证，只对含目标成分的奶制品扩增阳性， 检测结果均与食品标签相符。（2）所建立的谷类通用检测体系在 35 个循环内，大 II II 中文摘要 实时荧光  PCR 技术检测奶制品掺假方法研究 米、大豆源性检测体系在 40 个循环内，只针对目标成分进行扩增，与其它非目标 成分均无交叉扩增，通用性和特异性好，灵敏度分别为 0.01ng、0.1ng、0.1ng 的 目标 DNA，0.5%（w/w)、0.1%(w/w)、0.5%(w/w)的模拟样品，进一步经市售奶类 样品检测验证，1 份样品被检测出含大豆成分，其它结果均与食品标签相符。 2.奶粉中牛源性主成分定量研究：本研究建立的定量标准曲线方程为： y=-0.057x+32.759，相关系数 R 为 0.964，回收率在 109%～134%之间，8 份市售 奶粉样品中检测出 3 份样品的牛奶含量低于 50%，该 3 份样品进一步经谷类、大 米、大豆定性检测体系检测，证实其中有 1 份样品被非法掺入了非大米谷类源性 成分而另 2 份样品中未检测出非法掺入谷物、大米、大豆植物源性成分。 【结论】 本研究建立的奶制品中牛、羊源性成分主成分和谷类通用、大米、大豆源性 定性检测体系，经实验验证具有通用、特异、灵敏、实用等优点，可用于奶制品 中相关掺假的快速定性检测；本研究建立的奶粉中牛源性定量检测方法能够定量 检测出奶粉中的牛源性主成分质量分数，可为有关监督部门的相关食品检测提供 技术参考。 关键词：奶制品掺假；实时荧光 PCR 方法；定性；定量； 作 者：刘小艳 指导老师：傅春玲 PAGE PAGE III Real-Time PCR Method for the Detection of Adulteration in dairy products Abstract Real-Time PCR Method for the Detection of Adulteration in Dairy Products Abstract Objective: To establish real-time PCR protocols for detecting principal components of bovine, ovine and frequent adulterated ingredients of cereal, rice and soybean in dairy products. Meanwhile, explore quantification detection system to measure the concentration of principal components in milk powder based